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植物转录因子脱水应答元件结合蛋白(dehydration responsive elementbinding protein,缩写为DREB)在干旱、高盐及低温胁迫信号传递中起重要作用,它能与脱水应答元件(dehydration responsive element,缩写为DRE)特异结合、在低温、干旱、高盐胁迫条件下调控与植物干旱、高盐及低温耐性有关的功能基因的表达。因此利用转录因子来改良植物抗逆性,能获得较为理想的综合效果。现已从拟南芥中克隆及鉴定的DREB有两类,它们分别命名为:DREB 1A、DREB 1B、DREB 1C的DREB 2A、DREB 2B(LIU Qiang et.a1.2000)。试验中所用的DREB 1ACDNA事实上是由拟南芥DREB 1A的mRNA反转录转录合成的cDNA。试验以表达载体pCAMBIA 1301/DREB 1A为模板,通过PCR扩增编码DREB 1A转录因子的基因。用PCR扩增的目的片段和表达表达载体pGEX-4T-1构建重组表达载体pGEX-4T-1/DREB 1A。先用构建好的重组表达载体转化大肠杆菌(E.coli)克隆菌株DH 10 B,挑选阳性克隆进行菌落PCR、琼脂糖凝胶电泳、酶切以及靶基因测序等一系列验证后,再用经测序验证的重组表达载体转化大肠杆菌(E.coli)表达菌株BL 21(DE3)。小量表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明融合蛋白的表达量占菌体蛋白的50%以上,且以包涵体的形式存在。大量表达融合蛋白,纯化包涵体,切割融合蛋白,SDS-PAGE回收目的蛋白条带,以目的条带为抗原免疫兔子制备DREB 1A转录因子的多克隆抗体,ELISA检测结果表明所制备的多克隆抗体的效价达到25,600稀释倍数,可用于含编码DREB 1A转录因子基因的转基因植物后代的西部印迹(Western blot)。青霉菌[Penicillium chrysogenum(PEN)]干菌丝体[Dry mycelium(DM)]是一种制药产业废物,当作为一种有机肥料用于农业生产时,研究发现青霉菌干菌丝体能有效控制几种土传真菌疾病,如用5%和7%的PEN浸出液极大地提高棉花幼苗对镰刀霉[Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum(Fov)]和黄萎病[Verticillium dahliae Kleb(Vd)]的抗性,但其作用的方式至今仍未清楚(Suiyun et al,2006)。实验用青霉菌干菌丝体的5%(W/V)水浸出液浇灌子叶刚刚完全展开的棉花和西瓜幼苗,处理时间分别为4h、6h、8h、10h、12h、24h,对照用蒸馏水浇灌,提取处理和对照的棉花和西瓜子叶总RNA,用八种编码病程相关蛋白即PR-1a,PR-1b,PR-2,PR-3,PR-4,PR-5,PR-A和PR-B的cDNA片段作为探针,通过Northern印迹和放射自显影技术来检测相应病程相关蛋白基因其转录本的转录水平,以便从转录水平来解释青霉菌干菌丝体的抗菌机理。实验结果表明:青霉菌干菌丝体的水浸出液除对编码PR-4和PR-5转录本的转录水平没有影响外,对编码上述其余六种病程相关蛋白转录本的转录水平都有不同程度的促进作用。