论文部分内容阅读
烟草黑胫病是烟草产生连作障碍的主要病害之一,其病原菌为疫霉菌Phytophthora parasitica var. nicotianae,该病害的防治方法已成为烟草生产的研究热点。生物防治是目前研究克服土传病害的重要途径之一,因为生物防治具有抗病和环保的作用,而获得高效拮抗菌株是进行生物防治研究的基础。本研究从云南和安徽黑胫病重病烟田中采集健康植株根际土壤,从中共分离出细菌289株,通过平板对峙法从中筛选出对烟草疫霉(Phytophthora parasitica var. nicotianae)具有拮抗作用的12株细菌,抑菌率59.4%～71.1%；其中C-5菌株的拮抗活性最高,抑菌率为71.1%,抑菌直径达到2.8 cm。C-5菌株不仅对烟草黑胫病病原菌有较强的拮抗作用,同时对其他多种病原菌也具有拮抗作用,抑菌率均达53.3%以上。其中对甜瓜枯萎病病原菌的抑菌率高达73.3%；对青椒疫病、棉花枯萎病病原菌的抑菌率为66.7%和66.8%；对香蕉、黄瓜枯萎病以及黄瓜立枯病病原菌的抑菌率达53.3～55.0%；而对西瓜枯萎病病原菌却没有抑制作用。采用传统的细菌系统鉴定方法鉴定拮抗菌株C-5,结果发现它与多粘芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌都很相似,但无法精确确定其分类地位。采用16S rDNA序列分析法从分子角度确定菌株C-5的分类地位,结果表明菌株C-5与多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)的同源性为100%,最终鉴定其为多粘类芽孢杆菌。通过对C-5产酶能力的研究发现,菌株C-5具有产纤维素酶和蛋白酶的能力。其中产蛋白酶的水解圈达到23mm,产纤维素酶的水解圈达到3.3 mm,这可能在抗真菌上发挥一定的作用,当然,这并不排除其他酶或未知拮抗成分也在拮抗过程中发挥着作用。对菌株C-5的培养条件进行的初步测定结果表明,菌株C-5在30℃、pH 7.0、装液量为20%条件下生长最好,其最适碳源和氮源分别为蔗糖、蛋白胨,葡萄糖和硫酸铵次之。盆栽试验证明：利用C-5菌株制备的微生物有机肥能有效防治烟草黑胫病的发生,苗期防治率达80%；C-5菌株及其微生物有机肥的使用能改变根际土壤的微生物区系,和连作土壤(CK2)相比,使用微生物有机肥处理(MOF)和单加拮抗菌处理(ANT)的土壤中真菌数量减少,细菌和放线菌数量有显著增加。其中,细菌分别为CK2的2.4倍、3.5倍左右；放线菌为CK2的4.4倍左右、11.9倍左右。与CK2相比,MOF的鲜重、干重和株高分别增加约1.8倍、1.7倍和1.4倍；MOF与健康土处理(CK1)的鲜重和株高也有显著差异,分别增加1.4倍和1.3倍；MOF与OF的鲜重和株高有明显差异,分别约增加1.4倍和1.2倍,干重增加1.4倍。说明C-5对烟草具有促生作用,能提高烟草的产量。