牡蛎(Ostrea tailienwhanensis)ACE抑制肽的制备技术的研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:a410539939
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1.以大连湾牡蛎为研究对象,通过比较清蛋白、球蛋白、碱溶性蛋白、醇溶性蛋白四种蛋白占牡蛎总蛋白的比例,确定采用碱提法提取牡蛎蛋白:室温条件下,pH 12.0,浸提时间1.0 h,离心取上清,调整pH至4.0后,再次离心取沉淀得到牡蛎蛋白。牡蛎蛋白纯度为84.3%,蛋白提取率为65.6%。2.以ACE抑制活性为指标,考察了胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶酶解牡蛎蛋白的酶解效果,其中中性蛋白酶的酶解产物ACE抑制活性最强,根据单因素和正交试验结果,确定中性蛋白酶酶解牡蛎蛋白的最佳酶解工艺为:酶解时间为2 h、酶解温度为55℃、pH为8.0、加酶量为3%、料液比为4%。此条件下酶解产物的IC50=1.14±0.10 mg/mL。3.利用超滤装置对牡蛎蛋白酶解物进行分离,分子量范围在1 kDa3 kDa的酶解液(ONPH-B)ACE抑制活性最强,(IC50=0.66±0.06 mg/mL)。ONPH-B经Sephadex LH-20层析柱分离得到5个组分峰,其中ONPH-B-3具有最强的ACE抑制活性,抑制活性为61.9%通过反相高效液相色谱洗脱后,得到具有ACE抑制活性的ONPH-B-3-4、ONPH-B-3-5和ONPH-B-3-6,再次通过反相高效液相色谱进一步纯化后,确定ONPH-B-3-4-2与ONPH-B-3-5-2具有ACE抑制活性。对ONPH-B-3-4-2进行质谱分析,获得氨基酸序列为Val-Trp(VW)的二肽,分子量为303 Da。4.评价牡蛎酶解物的降血压作用是将ONPH-B组分(150 mg/kg/次)以灌胃方式早晚投喂原发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR),利用尾套法测量其收缩压(Systolic blood pressure,SBP)变化。结果显示,灌胃1 d(SBP=197 mmHg)后牡蛎酶解物与空白对照组相比表现出显著降低SHR的SBP(p<0.05),在第27天时SBP降到158.2mmHg,但是与阳性对照组相比降压效果低;连续灌胃28 d停药观察7 d,牡蛎肽仍表现出显著性的降压效果;同时牡蛎酶解物对SHR的体重变化不产生影响。
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