桑叶多糖制备纯化工艺及降血糖活性的研究

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桑叶多糖对糖尿病有明显的治疗作用,因此从桑叶中提取、纯化得到桑叶多糖并研究其药理学活性,对研制治疗糖尿病的新药具有重要的学术意义和实用价值。本文利用热水浸提法从桑叶中提取多糖,进行纯化精制,以提高多糖含量,并用絮凝纯化后得到的桑叶多糖进行降血糖活性方面的研究。首先,本文采用热水浸提法提取桑叶多糖,分别以不同的提取时间,提取温度,提取液pH、料液比(桑叶质量g:水体积mL)和提取次数为单因素,考察各因素对桑叶多糖得率的影响,并采用正交实验优化了桑叶多糖的水提取工艺,使总多糖的得率达2.89%;在醇沉工艺中,考察了乙醇浓度对醇沉效果的影响,确定最佳醇沉工艺条件,得到的醇沉物多糖含量为18.44%。在除蛋白工艺中,考察了盐酸法和三氯乙酸法对多糖含量和保留率的影响,发现先用三氯乙酸调至pH 5,再用盐酸调节pH至3时,多糖含量和保留率达到最高,分别为32.59%和85.42%。其次,提取液采用单因素实验优化大孔树脂纯化桑叶多糖工艺,得出最佳工艺条件,多糖含量42.16%,多糖保留率为81.54%。另外,本文利用壳聚糖絮凝剂纯化桑叶多糖,采用单因素实验和响应面实验优化得出了桑叶多糖的最佳絮凝工艺。在此工艺下,多糖保留率达90%以上,多糖含量最高可达61.59%。通过对壳聚糖絮凝纯化后多糖样品组分测定,发现样品中无机小分子含量很高,达到23.88%,其次是蛋白含量(7.83%)。最后,通过建立四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,对壳聚糖絮凝纯化后的桑叶多糖(纯度为59.22%)进行药理学活性实验,结果表明,桑叶多糖能够非常有效地降低糖尿病小鼠的血糖值,其中高剂量组的血糖抑制率达到81.14%,而且能够有效降低小鼠血清和肝脏中的MDA含量,效果优于二甲双胍阳性对照组,具有明显的降血糖和抗氧化协同作用。本文研究为天然桑叶多糖的提取与纯化工艺路线的选择提供了必要的基础,为桑叶多糖的降血糖活性提供了实验依据。
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