乳腺癌患者髓系来源抑制性细胞的鉴定与免疫作用研究

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目的:探讨乳腺癌病人体内是否有一群髓系来源抑制性细胞(MDSC)以及这群细胞的表型特点,检测MDSC对淋巴细胞的免疫作用,分析MDSC的分布与患者临床资料的相关性。方法:收集30例成对乳腺癌病人外周血及肿瘤组织,10例体检正常健康者外周血,通过流式技术检测MDSC的表型特点及比例。采用免疫磁珠技术分选乳腺癌病人肿瘤组织中的MDSC,通过瑞氏染色法观察分选后细胞的形态,分别利用MTT法、凋亡试剂法、流式细胞术检测MDSC对自体淋巴细胞的增殖和凋亡的影响,再利用ELISA法检测其对淋巴细胞分泌细胞因子的影响。利用Western Blot法检测MDSC中IDO的表达情况。以CD33为指标利用免疫组织化学染色法检测乳腺肿瘤组织石蜡切片中MDSC的分布情况,分析MDSC的分布与患者临床资料的相关性。结果:流式细胞仪检测结果显示乳腺癌病人肿瘤组织及外周血中有一群具有髓系前体细胞形态的MDSC,表面标志为lin1-CD45+CD13+CD33+CD14-CD15-。在正常人外周血、乳腺癌患者外周血、乳腺癌患者肿瘤单细胞悬液中MDSC所占比例分别为(4.9±4.38)%、(12.92±6.24)%、(17.18±5.19)%。与正常人外周血相比,乳腺癌患者外周血和肿瘤单细胞悬液中MDSC比例显著升高(P<0.05),而乳腺癌患者外周血和肿瘤单细胞悬液中MDSC比例无统计学差异。将淋巴细胞和肿瘤组织来源MDSC按照1:1、1:3、1:6比例混合培养三天,当IL-2为50IU/ml时自体淋巴细胞抑制率分别为(52.34±4.2)%、(56.53±7.1)%、(32.98±12.1)%,当IL-2为500IU/ml时自体淋巴细胞抑制率分别为(55.2±7.1)%、(68.4±1.2)%、(64.9±17.1)%。结果显示 MDSC 抑制 IL-2 介导的自体淋巴细胞增殖。将淋巴细胞和肿瘤组织来源MDSC按照1:1、1:3比例混合培养三天,当IL-2为500IU/ml时淋巴细胞凋亡结果分别为(33.55±10.49)%、(40.65±9.73)%,无MDSC混合的淋巴细胞组凋亡结果为(3.32±3.24)%。结果显示MDSC促进自体淋巴细胞调亡。将淋巴细胞和肿瘤组织来源MDSC按照1:1、1:3比例混合培养三天,收集细胞培养上清检测结果显示,当IL-2为500IU/ml时IFN-γ、TGF-β、IL-10的值差异有统计学意义。分别为IFN-γ由(43.19士2.32)ng/ml 减少到(26.95±4.55)ng/ml、TGF-β 由(61.36±6.02)ng/ml 升高到(140.34±17.11)ng/ml、IL-10 由(24.36土3.44)ng/ml 升高到(82.44±5.6)ng/ml。淋巴细胞分泌的IL-12、IL-4变化不明显。结果显示MDSC显著抑制自体淋巴细胞分泌IFN-γ,促进TGF-β、IL-10释放。WesternBlot检测发现MDSC中有IDO的表达。免疫组化显示乳腺肿瘤组织周围有MDSC细胞分布,细胞核较大,为肾形和马蹄形,2-4个核仁,胞浆丰富,细胞形态不规则,呈现出髓系前体细胞的形态,细胞呈簇状分布在肿瘤细胞周围。统计临床资料发现MDSC的分布与病理肿瘤大小相关(P<0.05),肿瘤体积较大者肿瘤周围浸润的MDSC越多,与年龄、绝经状况、临床分期、淋巴结转移、受体情况、PCNA及P53均不相关(P>0.05)。结论:乳腺癌病人肿瘤组织中存在一群具有独特表型特点的MDSC,表面标志为linl-CD45+CD13+CD33+CD14-CD15-。MDSC显著抑制IL-2介导的自体淋巴细胞增殖,促进其调亡,并显著抑制其分泌IFN-γ,促进TGF-β、IL-10释放。WesternBlot检测发现MDSC中有IDO的表达,MDSC的免疫抑制作用中IDO可能起到一定的作用。免疫组化显示乳腺肿瘤组织周围有MDSC细胞分布。统计临床资料发现MDSC的分布与病理肿瘤大小相关,检测MDSC含量变化有助于了解患者临床病情变化。
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