优质甘草组培快繁及遗传稳定性分析

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甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)为常用大宗药材,市场需求量大,野生资源供不应求,人工种植成为必然。为了快速推广种植甘草的优良品系,本实验进行了甘草的组培快繁和试管苗遗传稳定性研究,取得的主要结果如下:对影响甘草种子萌发的灭菌时间、激素处理、培养温度进行实验,可以得出,甘草种子经0.1%HgCl2灭菌时间为8 min,接种在含MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L的培养基上,培养温度为2530℃,萌发率达80%。在甘草组培快繁实验中,无菌苗新梢在培养基MS+6-BA 1 mg/L+IBA 0.25 mg/L+蔗糖30g/L中诱导丛状茎,4周后有效增殖倍数可达5.6;下胚轴在培养基MS+NAA 0.5mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30g/L中培养,愈伤组织诱导率为100%,鲜重净增3.4 g,愈伤组织在培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 0.5mg/L+蔗糖30 g/L中培养诱导分化,4周后分化率为28%。试管苗在培养基1/2MS+KH2PO4 13.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L中诱导生根,4周后生根率为98%。生根试管苗经炼苗后移栽到蛭石:珍珠岩:草炭灰(1:1:1)的基质中,74%左右的能成活。综合比较丛状茎诱导途径和愈伤组织诱导及分化途径,甘草试管苗快速繁殖以新梢诱导生成丛状茎的途径为较优选择。继代培养的甘草试管苗进行了形态观测、细胞学检测和SRAP检测。从外在形态上,试管苗的株型、叶片形状和颜色等方面表现正常。试管苗经流式细胞仪检测未见DNA倍数上的变化,染色体计数2n=2x=16,未发现数量上的改变。分子水平上,试管苗经SRAP检测,电泳图谱中的谱带数和大小均保持与对照(亲本)一致。初步检测的结果表明通过丛状茎诱导快繁得到的甘草试管苗能保持遗传的稳定性。
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