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第一部分慢性脑低灌注缺血大鼠海马CA1区GABAB受体动态变化与情感障碍的发生与发展目的：慢性脑低灌注损伤能引起情感障碍,其中以抑郁和焦虑样行为为主,其潜在机制目前还不明确。本实验旨在研究GABAB受体的两种亚基(GABAB1和GABAB2)在慢性脑缺血引起的情感障碍中的作用及其潜在机制。方法：采用永久性结扎双侧颈总动脉(Two-vessel occlusion,2VO)建立大鼠慢性低灌注脑缺血模型,大鼠随机分为模型组：2VO-4周组(2VO-4W)、2VO-8周组(2VO-8W)、2VO-12周组(2VO-12W),及对应的假手术4周组(Sham-4W)、假手术8周组(Sham-8W)、假手术12周组(Sham-12W)。用糖水偏爱实验、新环境摄食抑制实验及强迫游泳实验评价动物的抑郁样行为；用旷场实验、高架十字迷宫实验和社交实验评价动物的焦虑样行为。运用Western blot检测海马CA1区GABAB1,GABAB2亚基膜蛋白、浆蛋白及总蛋白的表达变化。结果：双侧颈总动脉结扎(4周、8周、12周)后：(1)在糖水偏爱实验中,模型组与假手术组相比,糖水摄入百分率明显下降,提示2VO大鼠出现快感缺乏；在新环境摄食抑制实验中,模型组与假手术组相比,摄食潜伏期明显延长,提示2VO大鼠出现抑郁样行为；在强迫游泳实验中,模型组与假手术组相比,累计不动时间明显延长,提示2VO大鼠出现绝望行为；(2)在高架十字迷宫实验中,模型组与假手术组相比,进入开放臂的时间和次数明显减少；在旷场实验中,模型组与假手术组相比,中央区域的时间明显缩短；在社交实验中,模型组与假手术组相比,社交时间明显缩短。提示2VO大鼠出现焦虑样行为；(3)2VO能引起大鼠海马CA1区GABAB1亚基的表达改变：在缺血4周时,GABAB1亚基的总蛋白表达下调35.09%,膜蛋白下调44.43%,浆蛋白上调28%；缺血8周及12周,GABAB1亚基的总蛋白、膜蛋白及浆蛋白无明显变化;(4)2VO能引起大鼠海马CA1区GABAB2亚基的表达改变：在缺血4周时,GABAB2亚基的总蛋白表达下调34.14%,膜蛋白下调50.93%,浆蛋白无明显变化；缺血8周时,GABAB2亚基的总蛋白表达下调26.88%,膜蛋白下调45.82%,浆蛋白无明显变化;缺血12周,GABAB2亚基的总蛋白表达下调21.48%,膜蛋白下调56.75%,浆蛋白无明显变化。结论：慢性脑低灌注损伤可引发抑郁样行为,也可引发焦虑样行为。缺血早期(4周)的情感障碍伴随GABAB1亚基和GABAB2亚基的表达变化,缺血延迟期(8周、12周)的情感障碍主要伴随GABAB2亚基的表达变化。GABAB1亚基和GABAB2亚基可能均参与脑缺血引起的情感障碍的发生过程,GABAB2亚基可能在脑缺血引起的情感障碍的持续过程中也发挥重要作用。第二部分α2肾上腺素受体激动剂可乐定通过上调海马CA1区GAD67及GABAB1亚基的表达改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆障碍目的：本实验旨在研究α2肾上腺素受体激动剂可乐定(Clonidine)对慢性脑低灌注引起的学习记忆损伤的保护作用及其潜在的分子机制。方法：采用永久性双侧颈总动脉结扎(2VO)建立大鼠慢性低灌注缺血模型,大鼠随机分为：假手术组(Sham)、2VO组、2VO+Clonidine组和Sham+Clonidine组,从第22天开始腹腔注射Clonidine (0.05mg/kg, i.p.),连续注射7天,每天1次。同时,应用水迷宫实验评价大鼠认知功能;采用免疫荧光技术检测神经元的损伤；运用Western blot检测海马CA1、CA3和DG区NeuN、GABAB1亚基和谷氨酸脱羧酶67 (glutamic acid decarboxylase 67, GAD67)的表达变化。结果：(1)2VO引起大鼠空间学习记忆能力下降；(2)2VO大鼠海马CA1区神经元显著受损,且对CA3区和DG区无明显影响;(3)2VO大鼠海马CA1区NeuN、GABAB1亚基和GAD67蛋白表达下调,且CA3区和DG区蛋白表达无明显改变。(4)Clonidine能改善2VO大鼠的空间学习记忆能力；使CA1区神经元的损伤得以减轻；并能逆转2VO大鼠海马CA1区NeuN、GABAB1亚基和GAD67的蛋白表达下调。结论：Clonidine可能通过上调海马CA1区NeuN、GABAB1和GAD67的表达水平,改善2VO引起的神经元损伤,减轻2VO引起的学习记忆障碍。第三部分激动GABAB2亚基通过BDNF/TrkB/NCAM信号改善海马CA1区Kir3通道膜表达从而减轻慢性脑低灌注大鼠的焦虑样行为目的：焦虑是脑缺血后常见的情感障碍,然而其潜在机制还不清楚。本研究在前期的基础上,研究GABAB2亚基在脑缺血引起的焦虑样行为中的作用及其可能的分子机制。方法：采用永久性双侧颈总动脉结扎建立大鼠慢性低灌注脑缺血模型；应用慢病毒沉默海马CA1区GABAB2亚基；应用旷场实验、社交实验评价动物的焦虑样行为；运用在体场电位记录动物的长时程增强(Long-term potentiation, LTP);运用Western blot检测GABAB2亚基,脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF),酪氨酸激酶B受体(tyrosine kinase B, TrkB),神经细胞黏附分子(Neural cell adhesion molecule, NCAM), G蛋白偶联的内向整流钾离子通道(G protein-activated inwardly rectifying potassium, Kir3)的三个亚基(Kir3.1、Kir3.2和Kir3.3)在海马CA1区的表达变化。结果：(1)2VO可诱发焦虑样行为;(2)2VO大鼠海马CA1区,GABAB2亚基膜表达下调；BDNF、TrkB和NCAM蛋白表达下调；Kir3.1、Kir3.2和Kir3.3通道膜表达上调。(2)GABAB受体激动剂Baclofen能减轻2VO大鼠的焦虑样行为；逆转GABAB2亚基膜蛋白的下调及BDNF、TrkB和NCAM的表达下调；并改善Kir3.1、Kir3.2和Kir3.3通道膜表达；(3)慢病毒沉默2VO大鼠CA1区GABAB2亚基后,Baclofen对焦虑样行为无明显改善作用,并无法逆转CA1区GABAB2亚基膜蛋白的下调和BDNF、TrkB和NCAM的下调,以及Kir3.1、Kir3.2和Kir3.3通道膜蛋白的上调。结论：激动GABAB2亚基可能通过BDNF/TrkB/NCAM信号改善2VO大鼠海马CA1区Kir3通道的膜表达,从而减轻慢性脑低灌注引起的焦虑样行为。