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猪圆环病毒(PCV)是近年受到广泛关注的危害世界养猪业的重要病源之一。PCV具有PCV1和PCV2两种基因型。根据致病性、抗原性、核苷酸序列,将从PK15细胞系分离的圆环病毒列为圆环病毒1型(PCVl),把与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等密切相关的圆环病毒列为2型(PCV2)。本研究主要是从河北保定地区某猪场疑似PMWS的发病猪病料中分离到一株病毒,经PCR鉴定、生物学特性的鉴定,进而建立快速准确的临床诊断方法。无菌采集疑似PMWS的病猪病料,将其腹股沟淋巴结接种PK-15细胞。由于猪圆环病毒在PK-15细胞上不产生细胞病变,接种72h后收毒,盲传至四代。根据GenBank上已发表的PCV2基因序列,设计并合成了一对扩增ORF2基因序列的特异性引物,对细胞毒提取DNA,经PCR扩增,得到485bp特异性的核酸片段。本研究采用过氧化物酶单层实验(IPMA)测定PCV2分离毒的TCID50,并基于此方法对理化特性进行研究。实验结果表明:该毒株病毒液在PH3和PH12作用1h后TCID50均没有显著变化,毒株表现出较强的耐酸碱性;对胰蛋白酶不敏感;经乙醚、氯仿处理后TCID50的差值均小于2,说明该病毒没有囊膜。试验结果均符合PCV2生物学特性。根据Genbank上已发表的猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的基因序列,应用Primer Premier 5.0软件进行分析,设计并合成扩增PPV VP2基因片段和PRV UL39基因片段的特异性引物,并建立多重PCR的方法,在同一个反应体系中可同时扩增PCV2、PPV和PRV的特异性片段。通过对引物用量、反应温度、模板用量等反应条件的优化,达到较为理想的扩增效果,并且特异性和重复性良好。之后对PCV2的PCR产物用XbaI单酶切,获得了267bp和228bp的两个片段,并构建质粒pMD18T-PPV和pMD18T-PPV,分别用BamHI和HindIII双酶切,获得PPV 158 bp和PRV 219 bp的目的片段,之后通过序列测序,分别证实了扩增的条带的准确性。本研究建立了用于检测PCV2的双向乳胶凝集实验的诊断方法,通过对乳胶最佳致敏浓度、最佳致敏温度和最佳致敏时间的测定,确定致敏乳胶的最佳条件,并对致敏乳胶的稳定性进行检验,包括保存的温度和保存时间的检查。乳胶凝集抗原质量的鉴定包括用PBS、BBS、生理盐水进行的自凝性检测和用PRV阳性血清、猪瘟阳性血清、PCV阴性血清和犊牛血清进行的特异性检测。结果表明,本研究所建立的PCV2双向乳胶凝集实验准确快速、简便特异,适用于基层单位用于血清学诊断。