MAP液对术中血液回收红细胞Ca2+超载与PS暴露的抑制作用研究

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目的:观察术中血液回收(IBS)红细胞Ca2+超载与磷脂酰丝氨酸(PS)暴露之间的关系和细胞形态以及甘露醇-腺嘌呤-磷酸液(MAP液)体外孵育对IBS红细胞Ca2+超载与PS暴露的抑制作用。方法:1.随机选择30例接受椎体手术的IBS患者。收集来自同一患者的IBS红细胞和新鲜动脉血各一份,将30例患者的血液样本分为三部分进行实验(每部分10例)。2.第一部分:将IBS红细胞与同一患者新鲜血浆一同孵育,此为实验组(I组),新鲜RBC为对照组(C组)。孵育前、孵育24、48小时后检测Fluo-3和/或AnnexinV阳性细胞及球形细胞的比例、形态变化。3.第二部分:将IBS红细胞(Ⅰ组)和新鲜RBC(C组)分别孵育于不同浓度离子霉素中2小时,流式细胞术测定Annexin V和/或Fluo-3阳性细胞比例。4.第三部分:将来自同一患者的IBS红细胞和新鲜血浆混合,一半与生理盐(C-NS组)水孵育,一半与MAP(I-MAP组)液孵育,24小时后检测AnnexinV和/或Fluo-3阳性细胞及球形细胞比例和细胞中腺嘌呤核苷酸水平。结果:1.第一部分:Ⅰ组孵育前、孵育24、48小时后Fluo-3、AnnexinV、双阳性及球形细胞比例均明显高于C组(P<0.001)。Ⅰ组Fluo-3阳性细胞比例与孵育24小时(r = 0.84,P<0.01)和48小时(r = 0.92,P<0.01)后的球形细胞比例相关。48小时后所有球形细胞都是Fluo-3阳性细胞。2.第二部分:Ⅰ组Fluo-3阳性、双阳性细胞的比例均显著高于C组(P<0.001),且比例随着离子霉素剂量的增加而增加。Ⅰ组AnnexinV阳性细胞的比例均高于C组(P<0.05),但组间比较无差异。3.第三部分:I-MAP组中腺嘌呤核苷酸浓度高于C-NS组(P<0.001)。I-MAP组Fluo-3阳性、双阳性和球形细胞比例显著低于C-NS组中比例(P<0.05)。AnnexinV阳性细胞比例没有显著差异。结论:1.IBS可能通过诱导形态学改变或通过在RBC表面暴露PS来损伤RBC。形态学变化可能主要与ATP水平降低继而导致细胞内Ca2+增加有关。2.PS暴露可以通过依赖和非依赖性Ca2+内流的机理发生。3.MAP液能为IBS红细胞提供能量,降低细胞内Ca2+浓度和Ca2+依赖性PS暴露,改善细胞形态。血浆中可能存在促进MAP液能量底物转运进入RBC的载体,对回收RBC有保护作用。
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