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白细胞介素-5（interleukin-5，IL-5)位于 Th2细胞因子群中，其在激发机体粘膜免疫、体液免疫等多种免疫调节机制方面都有十分重要的作用。然而目前鸡IL-5的研究仅仅停留在对其基因的克隆与原核表达，有研究报道称鸡 IL-5基因缺乏相应的转录启动机制，可能是个假基因。随着鸡 IL-5基因首次从鸡体内被成功克隆，那么现阶段该基因能否在体内进行翻译表达及表达产物是否具有活性功能，这些都是非常值得探讨的问题。因此本研究通过对鸡 IL-5基因在毕赤酵母中进行表达，利用酵母表达产物制备鸡 IL-5单克隆抗体，并对单克隆抗体的生物学性质进行分析。从而为进一步研究该基因的翻译表达及鸡 IL-5的免疫学功能奠定基础。其主要的研究内容如下： 1、鸡白介素-5酵母表达载体的构建与表达 应用鸡IL-5特异性引物以pMD18T-IL-5为模板扩增出鸡IL-5基因片段，将目的片段回收纯化后连接至毕赤酵母表达载体 pPICZαA，获得重组酵母表达质粒pPICZαA-IL-5。进而利用PmeⅠ线性化重组载体pPICZαA-IL-5并将其电转化入酵母菌X-33中，在1.5％甲醇浓度诱导下进行酵母表达，并对表达条件进行优化确定最佳诱导表达条件。结果显示鸡 IL-5基因获得成功的表达，诱导表达培养物上清中表达出具有反应活性的26KD左右的重组鸡 IL-5蛋白。其最佳表达条件为PH6.0、1.5%甲醇浓度、诱导96h。 2、抗鸡白介素-5蛋白抗体间接ELISA方法的建立 以纯化的鸡 IL-5蛋白作为包被抗原，建立检测鸡 IL-5蛋白抗体的间接ELISA方法。试验结果确定了间接ELISA的最佳反应条件：抗原包被浓度10.00μg/mL，包被时间为37℃2h，血清稀释度1:1600，HRP标记羊抗小鼠IgG抗体稀释度为1:1000，血清与抗原在37℃反应60min，血清和二抗于37℃反应60min；应用该方法对实验小鼠血清进行检测，结果显示建立的ELISA方法具有较好的特异性和重复性，适用于检测鸡IL-5蛋白抗体。 3、抗鸡白介素-5单克隆抗体的制备与性质分析 将纯化的鸡 IL-5蛋白与等量的弗氏（不）完全佐剂充分乳化后，采用颈部皮下注射方式，免疫6-8周龄的纯系 Balb/C雌鼠，经过四次免疫后检测血清效价达到1:104进行冲击免疫，三天后取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0在50%PEG4000作用下进行融合，经过HAT筛选培养基以及间接ELISA检测方法筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞株，经3次亚克隆最终筛选到2株单克隆抗体亚型为 IgG1+Kappa的杂交瘤细胞株。利用小鼠腹水法大量制备单抗腹水并用Protein G对腹水进行纯化，同时对IgG1亚型的2株单抗的腹水效价、抗体亲和度、生物学活性等进行分析，结果显示制备的2株单抗腹水效价分别达到1:64000和1:128000；腹水纯化效果良好，两株纯化的单抗浓度均达到3mg/mL以上，WB结果显示单抗能够和表达的鸡白介素-5蛋白发生特异性结合。