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子宫内膜炎是导致奶牛不孕症的生殖系统疾病之一。该病主要由分娩或产后子宫感染病原微生物引起。临床上多使用抗微生物药物对其进行治疗,在药物选择压力作用下,病原菌中的耐药菌株不断增多,不仅影响了畜牧业的良性发展,而且动物源性病原菌对抗微生物药物耐药性的形成也给人类健康带来了严重的潜在威胁。因此,为了对引起奶牛子宫内膜炎的病原菌进行危害性分析和评估,并指导临床合理用药,本研究对内蒙古呼和浩特市周边地区分离的奶牛子宫内膜炎大肠杆菌进行了血清型鉴定和MICS值测定。研究发现,该地区奶牛子宫内膜炎大肠杆菌的分离率为54.3%(57/105),且分离菌株的优势血清型为O111:K58(B4)。57株大肠杆菌对磺胺类、苄胺嘧啶类、四环素、头孢唑啉、广谱青霉素类的氨苄西林、阿莫西林和氨基糖苷类的卡那霉素、链霉素以及氯霉素、多粘菌素E的耐药率较高,在5098%之间;而对头孢噻呋、呋喃唑酮和氟喹诺酮类药物较为敏感,耐药率在13.735%之间。采用PCR技术和直接测序对临床分离菌株中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ整合子/基因盒及超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)不同型别基因的分子流行病学进行了调查和分析。结果表明,其中Ⅰ型整合子的检出率为36.8%,未检出Ⅱ、Ⅲ型整合子。对Ⅰ型整合酶基因阳性菌株进行基因盒插入区扩增,并克隆测序,结果显示,呼和浩特市周边地区奶牛子宫内膜炎致病性大肠杆菌中有7种基因盒流行,分别编码了对甲氧苄啶(dhfr, dfrA1, dfrA17, dfr2d)和氨基糖苷类药物(aadA1、aadA2、aadA5)的耐药性。其中,基因盒排列dfrA17-aadA5(69.1%)和dfrA1-aadA1(42.9%)流行最为广泛。通过分析57株大肠杆菌的耐药表型和Ⅰ型整合子/基因盒分子流行病学特征发现,菌株是否携带Ⅰ型整合子与其多重耐药水平有密切关系。整合子阳性菌株更趋于多重耐药,且所携带的耐药基因盒可解释菌株对磺胺、甲氧苄啶、氨基糖苷类的耐受性,而菌株对β-内酰胺类、四环素类、氟喹诺酮类药物的耐药表型与其是否携带Ⅰ型整合子及耐药基因盒相关性不强。本研究考察了不同型别ESBLS基因CTX、SHV和TEM在以上分离菌中的流行情况,结果发现TEM型基因最为流行,检出率为77.2%,而未检出其他两种基因型别。通过分析blaTEM基因阳性菌株与阴性菌株对β-内酰胺类药物的耐药情况,发现质粒介导的ESBLS的产生和传播是导致分离菌株对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要机制。从95.2%的Ⅰ型整合子阳性菌株质粒DNA上扩增出了TEM型ESBLS基因,此结果表明Ⅰ型整合子在产ESBLS菌株中的广泛分布,使耐药基因更易于在细菌间快速散播。随后,采用PCR技术从11株耐氟喹诺酮类药物的奶牛子宫内膜炎大肠杆菌中扩增了gyrA、parC、gyrB和parE基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),通过对PCR产物克隆测序,发现有4株菌GyrA亚基发生了Ser83→Leu、Asp87→Asn的氨基酸替代;11株菌GyrB亚基上均发生了Pro385→Ala;有2株耐药菌的ParE亚基发生了Ser458→Ala氨基酸替代;本研究首次发现了ParC亚基上发生的Ser58→Ile、Arg138→Asp、Arg138→Val、Pro140→Thr、Asn141→Lys氨基酸替代类型,并且证明ParC亚基上发生的氨基酸替代是该地区11株耐药菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性的主要机制之一。