白黎芦醇是一种植物抗毒素,在植物体中具有抗病原体感染的功能；白黎芦醇在动物体中具有抗肿瘤作用。白血病在我国人口中的发病率为2-4/10万人,是导致恶性肿瘤死亡的主要疾病之一。用普通和常规的治疗方法,包括白血病在内的多数肿瘤治疗都不理想。吸引很多学者注意的是天然食物成分能够抑制、延迟或逆转肿瘤启动和发展,白黎芦醇是一种天然植物多酚,它在葡萄(包括葡萄酒)和花生等多种植物中存在。白黎芦醇与多种疾病和肿瘤的抑制、延迟和逆转有关。最近的研究显示,白黎芦醇还具有化学保护作用,并且能诱导细胞周期抑制和凋亡。本研究主要通过白藜芦醇对急性T淋巴母细胞白血病Jurkat细胞和Burkitt B淋巴瘤Raji细胞的增殖抑制、凋亡诱导,探讨诱导肿瘤细胞死亡途径,分析白黎芦醇治疗白血病的可能作用。研究显示,白藜芦醇可以抑制Jurkat细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性抑制。自12h起,在0.16mmol/L处理组细胞中可见凋亡形态学改变,随时间延长更加明显；Hoechest 33258染色,可见半数抑制量处理24h组大部分细胞核呈均匀淡蓝色荧光,少部分细胞核呈亮蓝色,随培养时间延长,亮蓝色荧光染色细胞数量逐渐增多。经Wrigh-Giemsa染色和在透射电镜下可见部分细胞体积缩小,染色质浓缩、边集等现象。在琼脂糖凝胶电泳图谱中,0.16mmol/L白藜芦醇处理24h、36h、48h后可见DNA“梯形”图谱。流式细胞仪检测结果显示,处理48h后,各不同浓度处理组中均可检测到亚二倍体峰,0.015、0.03、0.06mmol/L、白藜芦醇处理组的凋亡细胞比率分别为5.49%、6.78%、12.01%,对照组为2.05%；白黎芦醇引起Jurkat细胞发生s期阻滞,经0.06mmol/L白黎芦醇处理48h后,62.5%的细胞被阻滞于细胞周期的S期。白黎芦醇抑制Raji细胞增殖,具有剂量和时间依赖性。但是,白黎芦醇处理的大多数Raji细胞没有显示出典型的凋亡特征。用半数抑制量(0.22mmol/L)的白黎芦醇处理Raji细胞48h,未见细胞质明显浓缩,核碎裂,染色体边缘化等典型凋亡特征；在琼脂糖凝胶电泳图谱中,0.22mmol/L白藜芦醇处理12h、24h、36h、48h后均未见DNA“梯形”图谱,所有的形态特征支持了白黎芦醇能诱导非凋亡死亡的设想。电镜特征是能够精确决定细胞死亡类型的一种检测方式,能够分辨出死亡类型的可能性。电镜观察显示,白黎芦醇处理48h后,Raji细胞出现了大量的自吞噬小泡。自吞噬泡内包含了降解的细胞器和细胞质成分。这些数据说明,Raji细胞经历了自吞噬细胞死亡。MDC是一种能与自吞噬体选择性结合的荧光物质,用来获得辅助证据支持白黎芦醇触发自吞噬的结论。用白黎芦醇处理Raji细胞后,采用MDC染色,荧光显微镜观察,结果显示,处理后细胞点块状荧光结构明显增加。作为对照,未处理Raji细胞和白黎芦醇处理的Jurkat细胞只有低水平的荧光。免疫印记分析显示,白黎芦醇处理Raji细胞,不能导致caspase-3的活化,显示白黎芦醇通过caspase非依赖依赖途径诱导Raji细胞自吞噬死亡组织蛋白酶D (Cathepsin D, Cath D)是一种溶酶体蛋白酶,在蛋白质降解和氧化应激、细胞因子或老化引起的凋亡过程中发挥重要的作用。因此,本研究探讨了组织蛋白酶D在白黎芦醇诱导的Jurkat细胞凋亡和Raji细胞自吞噬死亡中的作用。用白黎芦醇处理Raji细胞(半数抑制量：0.22mmol/L)和Jurkat细胞(半数抑制量：0.16mmol/L) 12h,24h和48h后,分别收获细胞,采用Western blot分析。在Jurkat细胞出现了32kDa的活性Cath D成分,但与对照组相比,变化不明显。在Raji细胞中,也出现了32kDa的活性Cath D成分,随处理时间的延长而减少。可能由于Cath D减少,在针对化学药物诱导肿瘤细胞凋亡产生抗药性的肿瘤细胞中,线粒体损伤较小,而通过自吞噬途径诱导细胞死亡。结论：1白黎芦醇可以抑制Jurkat细胞增殖,引起细胞周期的S期阻滞,并诱导其凋亡。2白黎芦醇可以抑制Raji细胞增殖,并诱导其自吞噬。3白黎芦醇既能通过caspase依赖途径诱导细胞凋亡,又能通过caspase非依赖途径诱导自吞噬细胞死亡。提示其作用于不同肿瘤细胞死亡机制存在明显差异。4白黎芦醇诱导的Raji细胞自吞噬死亡可能与组织蛋白酶D有关。5白黎芦醇诱导白血病细胞自吞噬死亡作用的新发现,提供了治疗白血病的新途径。本研究发现白黎芦醇既能诱导凋亡又可诱导自吞噬,显示了它作为一种新的肿瘤治疗模式的潜在价值。白黎芦醇治疗不同白血病的机制存在差异,其差异与诱导细胞凋亡或自吞噬途径的不同有关,该项白黎芦醇诱导白血病细胞死亡途径的研究为进一步从事细胞凋亡或自吞噬工作提供可靠的实验素材。而且,本研究证实了白黎芦醇通过新的死亡途径治疗白血病,即能够诱导自吞噬,为白黎芦醇临床治疗肿瘤提供理论参考。该项研究的发现进一步支持了诱导细胞死亡存在不同途径,通过对相应细胞凋亡或自吞噬死亡的差别分析,可以提供在不同疾病中控制细胞死亡的新的靶标,也为诱导凋亡的抗癌化学药物治疗无效的机制研究开辟了自吞噬研究新方法。但抗癌药物对自吞噬细胞死亡作用的影响方面还需要进一步探究。