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[目的]耳聋作为全世界最常见的残疾疾病之一,其严重影响患者的语言交流及生活质量,并为其家庭带来严重的经济负担。在我国,听力残疾人数约2000万人,其主要由遗传因素所致。本研究旨在通过对来自云南省部分地区特殊学校136例耳聋患者进行耳聋基因检测,以了解云南地区耳聋患者耳聋基因分布及其突变频率。同时,利用生物信息软件对MYO15A基因突变位点c.4970T>A进行分析,以预测该突变位点的基因保守性、致病性及结构功能变化。[方法]第一部分:依据纳入及排除标准,抽选云南省部分地区特殊学校136例重度或极重度耳聋患者,登记患者信息,询问耳聋相关病史,完善相关检查(一般体格检查、听力检查及耳鼻咽喉科专科检查)。在征得患者或患者监护人同意后抽取外周静脉血2-5ml,采用DNA提取试剂盒提取基因组DNA,应用高通量测序技术进行测序。针对该基因的测序深度为100×～200×,以hg19作为核基因的参考序列,对该基因的点突变和CNV(拷贝数变异)进行分析。本检测主要关注518个与遗传性耳聋相关的基因的突变,再经数据分析刷选出可疑突变及对可疑突变行Sanger测序验证。第二部分:利用T-coffee软件,对比不同生物MYO15A蛋白的氨基酸序列,对人类MYO15A蛋白的保守性分析。利用Polyphen-2软件预测对该突变位点的致病性分析。同时,利用SWISS-MODEL软件构建MYO15A蛋白三维模型。利用Chimera软件对比该突变的突变前后蛋白结构。[结果]第一部分:本次研究共筛选出136名重度-极重度耳聋患者,其中男性73人,女性63人。男女比例为1.15:1。重度听力损失患者28例(28/136,20.5%),极重度听力损失患者108例(108/136,79.5%)。对136名患者行耳聋基因检测,共检测出89例发生耳聋基因突变的患者,另47例患者未检测出,突变率(89/136,65.44%)。共检测出65个耳聋基因,检出率最高的四个基因为SLC26A4、GJB2、MYO15A 与 TMC1。其中 SLC26A4 基因突变 11 例(11/136,8.08%),热点突变为 c.1174A>T(2/136,1.47%)。GJB2 基因突变 7 例(7/136,5.14%),热点突变为 c.235delC(2/136,1.47%)。MYO15A 基因突变 7 例(7/136,5.14%),热点突变为 c.10350+2T>G(2/136,1.47%)。TMC1 基因突变 6 例(6/136,4.41%),热点突变为c.1672dupT(2/136,1.47%)。而GJB3基因突变患者仅有1例,且未曾发现有线粒体12SrRNA基因突变患者。第二部分:研究发现利用T-coffee软件,对比不同物种MYO15A蛋白的氨基酸序列,发现突变c.4970T>A所表达的第1657位基酸在生物进化上高度保守。利用Polyphen软件评估该基因突变位点的致病性,结果分值为0.098。以SWISS-MODEL软件构建的模型为基础,利用Chimera软件构建出MYO15A蛋白第1657位氨基酸突变前后蛋白三维结构。对比发现,突变后,周围其他氨基酸残基虽未出现明显改变,但目标氨基酸出现极性改变。[结论]第一部分:①云南地区热点耳聋基因为SLC26A4、GJB2、MYO15A、TMC1,与之其它地区相比,SLC26A4基因突变频率略低于全国平均值9%,而GJB2基因突变频率低于全国水平,这可能与样本数量或地区种族差异性有关。②MYO15A、TMC1与确表现出较高的比例。③GJB3基因突变在此次研究中表现出很低的突变率,仅0.73%(1/136),更而未发现有线粒体12SrRNA基因突变,表现出云南地区与其他地区较大的差异性。④此次研究发现了云南地区耳聋基因自有的特点,为云南地区的遗传咨询和分子诊断提供了坚实的理论依据。第二部分:①经软件分析,在MYO15A蛋白中,c.4970T>A所表达的氨基酸在生物进化上高度保守,而基因越保守,其表达蛋白的功能对生物越重要。②利用Polyphen软件评估c.4970T>A位的致病性,结果分值为0.98,说明该突变致病性可能性较高。③通过Chimera软件,模拟了 c.4970T>A位点突变前蛋白质三维结构及突变后蛋白质三维结构,发现第1657为疏水氨基酸异亮氨酸(Ile)变成亲水氨基酸天冬氨酸(Asn)后,氨基酸极性发生改变,而MYO15A基因突变位点c.4970T>A所表达氨基酸位于MYO15A蛋白头部(运动域)中,其突变可能导致MYO15A蛋白运动域功能受到影响。