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哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile20-like kinase1, Mst1)，又称丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(serine/threonine-protein kinase4, STK4)和应激应答激酶2(kinase responsive to stress2, KRS2)，是果蝇Hippo基因在哺乳类中的同源基因，编码丝氨酸/苏氨酸激酶，主要参与细胞生长、增殖、凋亡以及器官大小等的调控，具有抑癌作用。目的：从分子、细胞及动物水平探讨Mst1基因的抑癌作用及其部分的分子机理，模拟肿瘤的基因治疗，旨在为肿瘤的基因治疗进行一些有益的尝试并提供有参考意义的实验数据。方法：1、人野生型Mst1基因真核表达载体的构建及鉴定将Mst1cDNA连接至真核表达载体pEGFP-N1中，用卡那霉素抗性筛选，菌落PCR及测序并序列比对对重组质粒进行鉴定。2、高表达Mst1基因对人肝癌细胞HepG2作用的体外实验研究用PolyJetTM体外DNA转染试剂介导pEGFP-N1-Mst1转染人肝癌细胞HepG2，应用MTT比色法、流式细胞术及Hoechst33342染色法观察高表达Mst1对细胞增殖与凋亡的影响；RT-qPCR检测Mst1、CTGF、AREG和Survivin mRNA的转录水平，Western blot方法检测MST1、YAP、Phospho-YAP(Ser127)和Caspase-3蛋白的表达情况，初步探讨Mst1基因在体外抑制细胞HepG2生长的分子机制。另外，我们将MTT比色法、流式细胞术与Western blot方法相结合，初步探讨MST1蛋白的表达和活化与DDP诱导细胞死亡的关系。3、高表达Mst1基因对人非小细胞肺癌生长影响的实验研究用pEGFP-N1-Mst1转染人非小细胞肺癌细胞A549，初步分析细胞凋亡情况及MST1、YAP、Phospho-YAP(Ser127)蛋白和Mst1、CTGF、AREG和SurvivinmRNA的表达水平。用Mst1基因对A549细胞形成的裸鼠移植瘤进行模拟基因治疗，观察移植瘤的生长情况，并用免疫组织化学分析移植瘤中YAP及Phospho-YAP(Ser127)蛋白的表达，初步探讨Mst1基因抑制肿瘤生长的分子机制。结果：1、经菌落PCR、序列测定及比对结果显示成功构建了人野生型Mst1基因真核表达载体pEGFP-N1-Mst1。2、用PolyJetTM体外DNA转染试剂介导pEGFP-N1-Mst1转染人肝癌细胞HepG2，细胞生长抑制率及细胞凋亡率明显升高，且抑制率随处理时间的增加而升高，并且上调MST1的活性片段MST1(amino terminal truncated form, NT)、Caspase-3的活性片段Caspase-3(cleavage, CL)和YAP的磷酸化形式Phospho-YAP(Ser127)水平，显著下调CTGF、AREG和Survivin mRNA表达水平，DDP的干预具有促进MST1功能的效果。经DDP干预， HepG2-MST1细胞的增殖活性显著低于HepG2-Vect细胞(P<0.05)，细胞凋亡率显著高于HepG2-Vect细胞(P<0.05)，HepG2细胞中MST1(NT)和Phospho-YAP(Ser127)的水平都随DDP干预时间的延长而逐渐升高，但MST1和YAP蛋白总量并没有改变。3、转染pEGFP-N1-Mst1的A549细胞凋亡率升高，细胞中MST1(NT)和Phospho-YAP(Ser127)水平升高，CTGF、AREG和Survivin mRNA表达水平下降。应用Mst1基因、DDP和Mst1基因联合DDP的3个治疗组在27天后的平均瘤块体积和重量均显著低于Control和阴性对照组(P<0.01)，平均抑瘤率分别为(32.30±1.87)%、(51.77±3.98)%和(73.01±1.22)%，并伴随着YAP蛋白的胞核阳性的降低，YAP和Phospho-YAP(Ser127)蛋白的胞浆阳性的升高。结论：1、高表达Mst1基因促进HepG2细胞和A549细胞凋亡；2、高表达Mst1基因上调肿瘤细胞中MST1(NT)、 Caspase-3(CL)和Phospho-YAP(Ser127)蛋白的表达水平，下调CTGF、AREG和Survivin mRNA的转录水平，这可能是高表达Mst1基因抑制肿瘤生长的分子机制之一；3、高表达Mst1能够增强HepG2细胞对DDP的化疗敏感性，而DDP处理可促进MST1蛋白的切割活化；4、Mst1基因的表达对人非小细胞肺癌细胞A549移植瘤的生长具有一定的抑制作用，并伴随着YAP(Ser127)蛋白的胞浆水平和磷酸化水平的升高。综上所述，Mst1可能是一个潜在的抗癌靶点。