【目的】（1） 体外构建血管内皮生长因子VEGF₁₆₅基因腺病毒载体。（2） 对人骨髓基质干细胞（hBMSc）进行体外培养及扩增，观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点。（3） 将VEGF₁₆₅基因腺病毒载体共转染hBMSc，观察其表达。（4）观察转染对hBMSc增殖、分化的影响。（5） 观察eGFP示踪转染效率及VEGF₁₆₅的表达。 【方法】（1） 通过PCR方法人工合成VEGF₁₆₅的cDNA序列。合成完整的基因序列，测序。合成的VEGF₁₆₅两端带有EcoRⅠ和BamHⅠ位点，并克隆到pMD18-T载体中，对pMD18-T-VEGF₁₆₅进行双酶切。把含有pDNR质粒（含eGFP基因）的菌液接种到LB培养基，用试剂盒提质粒，得到的质粒进行EcoRⅠ和BamHⅠ的双酶切。回收5.6Kb左右的片段，与合成的带有EcoRⅠ和BamHⅠ位点的VEGF₁₆₅连接，过夜连接，转化感受态细胞，挑选单克隆，鉴定，构建pDNR-VEGF₁₆₅载体。通过Cre-loxP系统介导与pDNR-VEGF₁₆₅之间的重组。pInt.AV1.spat与pDNR-VEGF₁₆₅共转化BNN菌株的感受态细胞，在细菌内实现重组。挑选单克隆，进行酶切鉴定，构建pInt.AV1.sPAT.VEGF₁₆₅腺病毒表达载体。复苏并扩增293细胞。质粒pInt.AV1.SpaT-VEGF₁₆₅用PMlⅠ和PacⅠ进行双酶切，而pInt.B.B质粒带有腺病毒基因组的骨架序列，pInt.B.B用ClaⅠ的酶切后，得到线性化的pInt.B.B DNA。转染并荧光显微镜观察eGFP的表达，进行重组腺病毒的PCR鉴定，重组腺病毒扩增后氯化铯密度梯度离心法纯化Ad-VEGF₁₆₅，TCID₅₀ 50％组织培养感染剂量法，测定腺病毒滴度。（2） 骨髓取自早产死胎采用全骨髓法进行培养扩增，