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目的:抵抗素是新近发现的一种新的脂肪细胞因子,可以促发胰岛素抵抗和介导机体炎性反应。由于尚未在体内找到抵抗素的特异性受体,其在体内一系列调节活动的具体机制目前仍不清楚。NODs (NOD1、NOD2)是天然免疫系统中重要的受体之可以接受内源性信号分子的调控从而诱导无菌炎症。然而,NODs是否作为抵抗素的受体发挥作用,尚未见报道。因此,本试验期望通过研究抵抗素与NODs受体之间的关系,探究抵抗素是否通过NODs-NF-κB信号转导通路发挥其促炎作用。结果:(1)用不同浓度(50ng/mL、100 ng/mL、150 ng/mL、200 ng/mL)的抵抗素孵育RAW264.7细胞,培养至预定时间(0h、3h、6h、12h、 24 h)以后,立即收集细胞提取RNA和蛋白并收集细胞上清液,检测NODs及其信号通路下游信号分子RIP2、IKKβ和NF-κB等的基因和蛋白表达水平,细胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子的含量。结果显示,抵抗素可显著上调RAW264.7细胞中NOD2、RIP2和IKKβ的基因表达水平,而对NOD1基因的表达没有影响。并且,抵抗素显著上调NOD2和RIP2蛋白的表达水平,明显促进NF-κB蛋白向细胞核内转移。抵抗素能显著增加细胞上清液中’TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子的含量。(2)用20nM、50nM、80 nM的NOD2-siRNA转染RAW264.7细胞,通过检测NOD2基因和蛋白的表达水平,筛选转染条件。结果显示,80 nM的NOD2-siRNA致使细胞内NOD2的mRNA水平下降了75%,在蛋白表达水平降低60%,符合试验预期。(3)以80 nM的NOD2-siRNA转染细胞,然后加入200 ng/mL的抵抗素孵育细胞,检测NOD2及其下游分子的表达水平。结果显示,NOD2-siRNA+抵抗素组的NOD2和RIP2基因和蛋白的表达水平相比于抵抗素组显著降低;而IKKβ基因表达和NF-κB的核转移过程没有受到显著影响。细胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子的含量没有受到显著影响。(4)先以25 μmol/L的小白菊内酯孵育RAW264.7细胞1h,然后立即添加200ng/mL的抵抗素继续培养24 h,收集细胞上清液并检测IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平。结果显示,IL-6、IL-1β和TNF-a的含量均显著下降,表明由小白菊内酯通过阻断NF-κB的功能阻止抵抗素引起RAW264.7细胞炎症因子如IL-6、IL-1β和TNF-α的释放。结论:(1)抵抗素能促进RAW264.7细胞中NOD2基因和蛋白的表达,而对NOD1的表达没有影响。(2)在RAW264.7细胞中,抵抗素能通过促进NOD2及其下游信号分子的表达,活化NOD2信号转导通路,发挥促炎作用,但NOD2不是抵抗素的受体。(3) NF-κB是RAW264.7细胞中抵抗素发挥促炎效应的关键转录因子。