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该文采用基因工程技术,构建了两个分别表达绿脓杆菌外毒素PE(Pseudomonas Exotoxin)片段PE<,40>和重组毒素IL-Z-PE<,40>融合蛋白的表达载体.首先,采用PCR技术,从绿脓杆菌标准株PA103的基因组DNA(genome DNA)中扩增得到PE<,40>DNA片段,从质粒PTLIL-2上扩增得到IL-2 cDNA片段(不包含信号肽序列),然后将这两个片段分别插入质粒PUC19的多克隆位点(MCS),构建成克隆载体pPE<,40>和pIL-2.再用限制性内切酶从克隆载体上切下所需PE<,40>DNA片段和IL-2cDNA片段,将PE<,40>DNA片段插入质粒pRSET<,(B)>中的多克隆位点(MCS),构建成毒素基因PE<,40>的表达载体PBP<,40>;又将IL-2 cDNA片段和PE<,40>DNA片段插入质粒pRSET<,(A)>中,构建成表达载体pAIP<,40>,使IL-2-PE<,40>嵌合基因处于pRSET<,(A)>中T<,7>启动子的下游.两种表达载体用IPTG/乳糖诱导在大肠杆菌中进行了表达.对重组体进行了酶切和PCR鉴定,对表达产物进行了SDS-PAGE分析和血清学检查,证实重组体表达产物的忠实性.