乳酸菌对氟喹诺酮类药物耐药机制的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kjc
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本研究以源于内蒙古地区的羊乳及其制品、婴儿及乳牛粪便中分离的10株乳酸菌为研究对象,以标准敏感菌为对照,首先用试管两倍稀释法测定试验菌株对四种氟喹诺酮类药物(氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星)的最小抑菌浓度(MIC),并以MIC值为参考值用杯碟法通过抑菌直径的判断筛选出耐药菌株。对耐药菌株通过乳酸菌的16SrRNA引物进行PCR扩增并对PCR产物测序以进行鉴定。然后通过荧光分光光度法结合外排蛋白抑制剂对试验菌株的一种耐药机制——主动外排系统做一证实。另一种可能存在的耐药机制拓扑异构酶Ⅱ(DNA旋转酶)中gyrA基因和拓扑异构酶Ⅳ中parC基因的氟喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)的点突变,分别用相应的引物对12株耐氟喹诺酮类药的乳酸菌的QRDR区进行PCR扩增,并选择其中2株菌进行QRDR基因序列测定来确定。试验菌株对氟喹诺酮类药物均耐药,并且其耐药机制一部分是由于乳酸菌主动外排系统的作用引起的,但是外排系统只是乳酸菌耐药的一个原因,试验菌株还存在因拓扑异构酶ⅡgyrA基因突变引起氨基酸位点发生变异导致的耐药性。
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