【摘 要】
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食源性致病菌传统的检测方法一般需要6~7 d,如此长的检测周期无法满足企业、国家相关部门对日常产品质量快速检测的实际需求。因此,建立快速、灵敏、简便的检测方法对食源性
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食源性致病菌传统的检测方法一般需要6~7 d,如此长的检测周期无法满足企业、国家相关部门对日常产品质量快速检测的实际需求。因此,建立快速、灵敏、简便的检测方法对食源性疾病的预防和保障食品安全性具有重要意义。本研究针对两种食源性致病菌―克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)及单核增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称L.monocytogenes)开展了相关研究,具体内容如下:1.制备了抗Cronobacter的单克隆抗体。以克罗诺杆菌的细胞碎片为免疫原,经过4次免疫、两次亚克隆、多次阳性筛选后,成功获得了1株稳定分泌抗Cronobacter单克隆抗体的杂交瘤细胞株5-H6。斑点杂交结果表明,该单克隆抗体能识别3个种,分别为C.muytjensii、C.turicensis和C.dublinensis,且与金黄色葡萄球菌有一定的交叉反应,与藤黄微球菌及枯草芽孢杆菌有轻微的交叉反应。对C.muytjensii ATCC51329、C.muytjensii SR1074B、C.turicensis CICC24178以及C.dublinensis CICC24179的效价分别为1:32000、1:32000、1:16000以及1:16000;Western-blot结果表明该细胞株对这3个种的抗原识别表位均为脂多糖物质。2.建立了10 mL体系两步法磁分离检测L.monocytogenes的方法,与传统免疫磁分离方法相比,该方法抗体用量降低了14倍。在最佳磁捕获条件下(生物素化抗体用量5μg、磁珠用量700μg、免疫反应时间60 min、磁捕获时间30 min、磁分离时间3 min),该方法与PCR技术结合检测PBS溶液及加标牛奶中L.monocytogenes的最低检测限分别为8×10~0 CFU/mL和8×10~1 CFU/m L,且与其他非目标菌无交叉反应,整体检测时间小于7 h。50 mL体系中,通过两步法磁分离优化条件,发现磁珠用量高达3.5 mg,后续工作应继续探讨降低磁珠用量的方法。
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