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男性不育是一种具有遗传基础的复杂疾病，雄性动物模型、突变基因筛选等相关研究已证实了精子发生障碍遗传学病因的普遍性。精子发生过程中受许多基因的精细调控,基因缺失或突变均可导致精子发生过程中断。由遗传缺陷(包括基因突变和染色体异常)引起的精子发生障碍约占男性不育症患者总数的30％以上。Y染色体上的基因缺陷是导致男性生精障碍的重要因素之一,其中无精子症因子(azoospermia factor,AZF)区的基因缺失与男性不育关系十分密切。泛素特异性蛋白酶9y(ubiquitin specific peptidase9,Y-linked)基因是AZF区的重要基因之一，研究显示泛素-蛋白酶体系统参与精子发生的不同阶段包括有丝分裂，减数分裂和减数分裂后阶段的发生过程，在整个精子的形成过程中发挥重要作用，近年来相关研究表明USP9Y基因的缺失和突变与不育男性无精子症和严重少精子症之间存在密切联系。明确USP9Y基因的功能及其在雄性不育中的分子作用机制,将为临床男性不育提供早期和确切诊断、合理的治疗方法以及遗传咨询提供理论基础。 目的：通过检测Usp9y在小鼠不同发育时期各种组织以及睾丸发育相关细胞株中的表达，明确该基因的表达与定位；结合生物信息学分析，探究Usp9y的功能；研究Usp9y在pcd雄性不育小鼠睾丸中的表达，该基因与引起该小鼠不育表型的突变基因Nna1之间的关系，以及pcd小鼠睾丸中与精子发生相关基因和MAPK、NF-κB信号通路中关键因子的表达，进而研究该基因在小鼠精子发生中的作用和分子机制。 方法：第一部分1.运用RT-PCR和western blot方法检测细胞和小鼠组织Usp9y基因表达的特异性；2.用Real-time PCR方法检测不同日龄小鼠睾丸中Usp9y基因的表达差异性；第二部分1.用分子克隆方法构建pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)真核表达载体；2.通过磁珠转染的方法将pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)转染到HEK293T细胞中，并通过荧光观察和western blot方法检测其在真核细胞中的表达；3.通过磁珠转染的方法将pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)和pCMV-Myc-Nna1共转染至HEK293T细胞中，用免疫共沉淀方法分析USP9Y蛋白和NNA1蛋白之间的相互作用；4.运用单分子表达谱方法研究pcd小鼠中Usp9y基因以及其他与精子发生相关基因和信号通路关键因子的表达。 结果：1.RT-PCR实验证实Usp9y在小鼠睾丸组织中特异性表达，与以往报道的用Northern blot检测结果一致。2.荧光定量实验结果发现18日龄的小鼠睾丸Usp9y表达升高。3.Usp9y在小鼠TM3睾丸间质细胞和GC1spg精原细胞中表达，在15P-1支持细胞中未检测到表达。4.成功构建pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)表达载体为后续实验提供基础。5.免疫共沉淀实验发现Nna1的C端(nt1865-3780)与pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)结构域之间存在相互作用。6.单分子基因表达谱分析发现pcd3J突变型小鼠睾丸组织中Nna1表达下调，Usp9y表达量明显增高，该结果与以往基因芯片的结果一致。另外NF-κB信号通路中的Ikbkg、Ikbkb基因表达显著上调。 结论：1.通过RT-PCR的方法确定Usp9y基因在小鼠睾丸间质细胞及精原细胞内表达；2.小鼠Usp9y基因在小鼠出生后18天表达明显增高，说明Usp9y基因在精子发生早期可能具有显著作用。3.USP9Y与NNA1可以形成免疫沉淀复合物,说明二者之间存在一定的相互作用,但仍需进一步证明该作用属直接作用还是间接作用，该结果提示二者可能共同参与小鼠的精子发生，或在精子发生中具有重要作用。4.NF-κB细胞信号通路等可能参与了pcd小鼠精子发生。