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目的由耐碳青霉烯多重耐药不动杆菌引起的严重院内感染近年呈现逐渐上升的趋势，使临床医生面临巨大的挑战，对其耐药机制的研究成为了一个重要的课题。本试验采用分子生物学方法研究鲍曼不动杆菌临床株对亚胺培南和美洛培南耐药机制包括细菌产OXA型碳青霉烯酶和外膜孔通道蛋白的缺失，为指导医生合理使用抗菌药物，以克服或减少细菌耐药性的出现或传播，以及新型抗菌药物的研制提供依据。方法1、菌株：从收集的天津市2001年～2005年鲍曼不动杆菌20株临床株中筛选出对碳青霉烯类抗菌药物（亚胺培南和美洛培南）耐药的菌株。2、药敏试验：采用琼脂纸片扩散法（K-B法）和微量肉汤稀释法测定临床菌株对13种常用抗菌药物的敏感性。3、PCR扩增碳青霉烯酶blaOXA-23-like基因：根据GenBank公布的序列，设计一对blaOXA-23和blaOXA-27基因的通用引物。上游引物SQ1 5’-GATGTGTCATAGTATTCGTCG-3’，定位于编码基因开放可读框的-108～-88位碱基；下游引物SQ2 5’-TCACAACAACTAAAAGCACTG-3’，定位于编码基因开放可读框的+930～+950位碱基，进行聚合酶链式反应（PCR），产物在0.8％琼脂糖凝胶电泳分析。4、外膜蛋白提取及进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。5、PCR扩增外膜蛋白carO基因：根据GenBank公布的序列，设计carO基因的特异性引物。上游引物OMP1 5’-ATGAAAGTATTACGTGTTTTAGTG-3’，定位于carO基因+1～+24位碱基；下游引物OMP2 5’-TTACCAgTAgAAgTTTACACC-3’，定位于carO基因+724～+744位碱基，进行PCR扩增，产物在0.8％琼脂糖凝胶电泳分析。6、PCR产物序列分析。结果1、药敏试验：从20株鲍曼不动杆菌的临床株中筛选出3株对亚胺培南和美洛培南耐药的临床株AB13、AB24和AB173，对13种临床常用的抗菌药物的药敏结果显示：AB13、AB24和AB173除对氧氟沙星、左氧氟沙星呈敏感外，对环丙沙星低度耐药，并且几乎对所有测试的β-内酰胺类（哌拉西林、头孢吡肟、头孢他啶、头孢氨噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢哌酮／舒巴坦）、氨基糖甙类（阿米卡星、庆大霉素）和四环素高度耐药，为多重耐药株。2、blaOXA-23-like基因PCR-DNA序列分析：使用引物SQ1和SQ2，3株耐药临床株AB13、AB24、AB173 PCR扩增产物均出现一条1058bp大小的阳性条带，1株敏感株AB942和对照菌株大肠埃希菌ATCC25922、嗜麦芽窄食单胞菌Sme006 PCR扩增均呈阴性。3条PCR产物全部进行测序分析，结果显示AB13、AB24和AB173编码序列完全一致，与GenBank中的blaOXA-23基因序列对比未出现变异，一致性100％。3、外膜蛋白电泳：SDS-PAGE分析显示与敏感株AB942电泳条带相比较，耐碳青霉烯临床株AB173的外膜蛋白电泳条带在29KDa处出现明显缺失，其余2株耐碳青霉烯临床株AB13、AB24无明显条带差异。4、carO基因PCR-DNA序列分析：使用引物OMP1和OMP2，对carO基因进行PCR扩增，结果显示碳青霉烯敏感的临床株AB942、碳青霉烯耐药的临床株AB13和AB24（SDS-PAGE凝胶电泳条带无变化）、碳青霉烯耐药的临床株AB173（SDS-PAGE凝胶电泳29KDa条带处缺失）在744bp处均出现了阳性扩增条带。将AB942、AB13、AB173的PCR产物进行序列分析，与GenBank中的carO基因序列（AY684798）比较相似性分别是81％、80％、77％。根据编码区碱基序列推导的氨基酸序列与GenBank中的CarO蛋白氨基酸序列（AAV80243）相似性分别是76％、72％、74％。结论3株多重耐药鲍曼不动杆菌临床株都携带blaOXA-23基因，其中一株还伴有外膜CarO蛋白（29KDa大小）缺失，可能与碳青霉烯耐药有关。carO基因变异较大，基因变异与蛋白结构和功能的关系有待于进一步研究。