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宫颈癌是女性最为常见的恶性肿瘤之一,影响着全球女性的身心健康与生活质量。据统计,2012整年全球宫颈癌新发病例527,600例,年死亡数为265,700例。2014年美国大约有12,360例新发的宫颈癌病例,其中4,020例患者死亡。在发展中国家,该病的发生率及其导致的死亡率均远高于发达国家,且发病率逐年呈年轻化趋势,故政府及医疗体系应加强对宫颈癌的早期筛查与防治的重视。宫颈上皮可以发生鳞状上皮化生,根据细胞形态是否成熟又分为成熟型和不成熟型。其中,不成熟鳞状上皮化生(immature metaplasia,IM)可以发展为宫颈鳞状上皮内病变(squamous intraepithelial lesion,SIL),进而可能恶变成浸润性癌。即使部分宫颈SIL可能消退或逆转,并不发展为恶性病变,但做好早期的诊断和治疗也是至关重要的。在临床病理诊断工作中,往往因为IM与SIL容易混淆而出现鉴别困难的情况,而且宫颈SIL的级别和程度的判定也缺乏明确的客观准则和有效的诊断标准。但这两种病变的生物学性质以及患者的治疗方法和预后却有差异,这就需要通过免疫组织化学等辅助手段来协助诊断。大量研究表明,P16蛋白在IM、子宫颈低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、子宫颈高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组织中的阳性表达率逐渐升高,具有诊断意义。Ki-67是一种代表增殖指数的核抗原,通常在正常及IM组织的宫颈鳞状上皮中,Ki-67主要局限表达于基底层及副基底层细胞,而在LSIL组织中Ki-67主要表达于鳞状上皮的下1/3,随着SIL级别的升高,Ki-67的表达呈增强趋势,在HSIL组织中,可有鳞状上皮上层细胞着色。为了给临床病理医师提供更加准确、快捷的辅助诊断手段,本课题分别应用免疫酶组织化学单染(免疫组化单染)及免疫酶组织化学双重染色(免疫组化双染)的方法,检测不同病变的宫颈上皮组织中P16和Ki-67的表达以及共同表达情况,探索免疫组化双染方法在宫颈鳞状上皮内病变的诊断、鉴别诊断及分级诊断中的价值。目的1.检测P16、Ki-67在不同病变的宫颈鳞状上皮组织中的各自表达情况,探讨P16及Ki-67的表达水平在鉴别不同宫颈组织病变上的价值。2.检测P16、Ki-67在宫颈鳞状上皮内病变中的共同表达情况,探讨免疫组织化学双重染色方法在该类病变病理诊断及程度分级中的应用。材料和方法1.筛选2011年1月—2015年12月郑州大学第一附属医院妇科门诊患者的宫颈活检组织137例。经病理诊断后,不成熟鳞状上皮化生组织15例,低级别鳞状上皮内病变组织32例,高级别鳞状上皮内病变组织90例。2.运用免疫组化单染检测所有组织中P16和Ki-67的表达情况,运用免疫组化双染检测所有组织中P16和Ki-67是否有共同表达及表达是否有差异。3.统计学处理:使用统计软件SPSS17.0进行数据分析和χ~2检验,P<0.05时认为差异有统计学意义。结果1.在单染切片中,P16在IM组织中呈阴性;LSIL组织中,P16呈不连续、灶状分布,阳性强度比较弱,阳性细胞主要分布于宫颈鳞状上皮层的下1/3;HSIL组织中,P16呈鳞状上皮中下2/3层甚至全层连续、弥漫强阳性。P16在IM、LSIL及HSIL组织中的阳性率分别为0%、62.50%、92.22%,3组间比较差异有统计学意义(χ~2=61.75,P<0.05)。2.在单染切片中,Ki-67在IM组织中主要表达于基底细胞或副基底细胞;在LSIL组织中则主要表达于鳞状上皮的下1/3层细胞;在HSIL组织中Ki-67阳性细胞可分布于鳞状上皮的中下2/3层甚至全层,本研究中IM、LSIL及HSIL组织中Ki-67阳性细胞数的均值分别为7.21%、16.41%、43.46%,3组间比较差异有统计学意义(χ~2=23.97,P<0.05)。3.在双染切片中,与单染切片比较的结果表明,双染未导致P16、Ki-67阳性信号的丢失。P16阳性区域中,Ki-67阳性细胞数的均值为35.14%,P16阴性区域中,Ki-67指数均值为7.68%,且随着宫颈鳞状上皮内病变病变程度的加重,P16/Ki-67同时表达的情况逐渐增多,在IM、LSIL及HSIL组织中两者共表达率分别为0、51.35%、96.04%,3组间比较差异有统计学意义(χ~2=74.29,P<0.05)。结论1.本实验验证了P16和Ki-67在宫颈不成熟鳞化及不同级别的宫颈鳞状上皮内病变中的表达有明显差异,联合P16和Ki-67有助于将宫颈不成熟鳞化与鳞状上皮内病变鉴别开。2.P16和Ki-67在子宫颈鳞状上皮内病变中的共同表达与病变级别呈正相关,表明免疫组化双染可应用于宫颈鳞状上皮内病变的诊断和分级。同时由于其在诊断效率方面的优越性,使它比常规免疫组化方法具有更为重要的临床应用价值。