论文部分内容阅读
目的：提取、分离、纯化并且鉴定BCG的有效成分，分析BCG不同有效成分及Ag85B对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用及诱导小鼠淋巴细胞产生细胞因子的作用探讨卡介苗、其有效组分及Ag85B的免疫调节活性。
方法：
1.采用MTT法测定不同浓度的卡介苗对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用。
2.采用ELISA方法检测经过不同浓度卡介苗作用后诱导小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、TNF-α、INF-γ等细胞因子的含量。
3.采用酶裂解法和超声波破碎法对BCG进行裂解，提取其活性蛋白成分。
4.采用紫外吸收比色法测定提取蛋白的纯度；应用考马斯亮兰G250方法测定提取物的蛋白含量。
5.采用葡聚糖凝胶层析方法对BCG提取物进行组分分离。采用SDS-PAGE凝胶电泳方法对层析后的BCG提取物进行纯度及分子量的鉴定。
6.将构建的pGESAg85B/BL21活化后接种于LB培养基中，异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达，包涵体变性后经梯度浓度尿素复性,GSTSepharose亲和层析、凝血酶切除GST并再次亲和层析纯化(本过程均在日本大阪高分子化学实验室完成)。
7.采用MTT法测定BCG有效提取成分及Ag85B对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用，同时采用ELISA方法检测经过BCG有效提取成分及Ag85B诱导作用后小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、TNF-α、INF-γ等细胞因子的含量。
8.所得数据与BCG的相关数据进行统计分析。
结论：
1.卡介苗对于小鼠脾淋巴细胞的增殖及诱导细胞因子的产生具有促进作用，而且，这种作用具有一定的剂量效应关系。
2.BCG及其有效提取成分和Ag85B对小鼠脾淋巴细胞都具有促进增殖的作用，而且随着浓度的增加这种促进作用不断增强。当卡介苗提取物浓度达到640μg/ml时，这种增殖作用最强；Ag85B浓度达到100μg/ml时，这种增殖作用最强。比较而言，Ag85B的作用最为显著。
3.BCG的提取物中的BCGE2及BCGE3对于小鼠脾淋巴细胞增殖作用较BCGE1的作用更为明显。
4.BCG有效提取成分和Ag85B都能促进小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、TNF-α、INF-γ。其中，Ag85B的促进作用最强。