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纤维素是自然界中存在最广泛的一类碳水化合物,同时它也是地球上数量最大的可再生资源。利用微生物生产的纤维素酶将其转化为人类急需的能源、食物和化工原料,对于人类社会解决环境污染、食物短缺和能源危机具有重大的现实意义。本课题利用刚果红选择平板与以不同的作用底物作碳源进行液态发酵直接测定酶活相结合的方法,从草鱼肠道内筛选出了一株能产纤维素酶的细菌菌株,并对筛得菌株的液态发酵产酶条件进行了研究,初步确定该菌株产酶的最佳培养条件为:初始pH值为7.0-7.3,接种量为5%(v/v),培养温度为37℃;最佳培养基为:1%(w/v)羧甲基纤维素钠(CMC-Na),1%(w/v)蛋白胨,0.1%(w/v)KH2PO4,0.5%(w/v)NaCL。在最佳培养条件下培养该菌株,对菌株液态培养的混合物,通过超声波破碎细胞壁、磁力搅拌菌体、离心过滤菌体等方法处理发酵液,检测并比较纤维素酶的酶活,确定了该菌株所产的酶为胞外酶。利用盐析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析,Sephadex G-75凝胶过滤等方法得到纯化的酶,经过SDS-聚丙烯酰胺电泳检验,初步判定该酶为多亚基结构。对纯化后的纤维素酶的酶学性质进行了研究。以羧甲基纤维素作为底物时,该菌株所产纤维素酶的最适宜的催化温度为55℃,酶反应的温度范围较宽,在45℃-65℃的温度范围内,热稳定性良好,在80℃条件下仍残存有30%的酶活。最适宜的pH值为7.0,在4.0-7.0之间的pH值范围内,酶的活力较稳定。Mn2+、Mg2+对酶的活性有激活作用。Fe2+、Ca2+、Zn2+对酶的活性有抑制作用。Cu2+、Co2+有明显的毒害作用。以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物的Km值为5.3×10-3g/ml。