猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus, PCMV)可引起仔猪包涵体鼻炎,流产或者新生仔猪死亡。目前,该病毒已广泛存在于世界各地,其血清阳性率均可达90%以上。由于PCMV体外培养技术尚不成熟,对PCMV的研究相对较少,国外的研究主要集中在异种器官移植,研究表明,潜在的PCMV可在异种器官移植中被激活,并在此期间大量的繁殖,从而产生免疫抑制；在体外,PCMV的感染可激活内皮细胞而产生消耗性凝血障碍,但其在体内能否产生相应的作用还有待证实。环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是一种恒温核酸扩增方法,只需在恒温条件下保温几十分钟就可快速完成核酸的扩增,可用于病原的快速检测。本研究拟针对PCMVgB基因建立检测猪巨细胞病毒的LAMP方法,结果显示可用于新型PCMV检测试剂盒的研发,以期能够对PCMV进行快速、简便的检测。本研究还利用所建方法开展了对四川省多地区PCMV分子流行病学调查,调查结果对PCMV综合防控及净化与异种器官移植的选择等具有重要意义。本实验对PCMV gB基因进行了以下研究：1.猪巨细胞病毒的环介导的等温扩增检测方法的建立设计LAMP引物,并对反应体系与条件进行优化,确定了LAMP最佳反应体系为：8U Bst DNA聚合酶；2.5μL Bst DNA聚合酶缓冲液(200 mM Tris-HCl (pH 8.8), 100mM KCl,100 mM (NH4)2SO4,1% Triton X-100); 3.0 mM硫酸镁；1M甜菜碱；600μM的dNTP(各-2.5mM); 0.25μM的PCMV-F3和PCMV-B3; 2 μM的PCMV-FIP和PCMV-BIP; 0.5μL pMD19-gB重组质粒；LAMP最佳反应条件为：于电热恒温水浴锅中65℃反应60 min,后于80℃10 min终止反应。LAMP方法的特异性试验结果显示,仅PCMV产生特异性条带,说明所建的LAMP方法具有高度的特异性.LAMP方法的敏感性试验结果显示,LAMP的检测灵敏度为1.0×107倍稀释,而常规PCR方法检测极限灵敏度为1.0×106倍稀释,表明LAMP方法的检测灵敏度是常规PCR检测方法的10倍。2.以LAMP方法与PCR方法同时对待检的136份临床样品进行检测,其结果表明PCMV在中国四川地区的感染率可达66.2%(90/136),其中尤以哺乳仔猪感染率最高73.5%(39/53),其次是种母猪为67.3%(33/49),而种公猪的感染率相对较低,为30.8%(14/21)。3.本试验同时还以PCR/RT-PCR方法对四川省部分地区猪巨细胞病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒与猪瘟病毒的混合感染情况进行了调查,结果显示PCMV与上述其他病毒的混合感染率可达80%(72/90),其中与PRRSV的混合感染可能性最高,为41.9%(57/136)。而三种病毒同时感染的病例中尤以PCMV、PRRSV、CSFV混合感染可能性最高,可达11.8%(16/136)。另外,有两份样品均感染四种病毒。