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蜱是吸血性体外寄生虫,其吸血过程中对宿主的损伤和引起的蜱传病,对畜牧业经济和人类的健康造成影响日益严重,因此世界范围内对蜱的防控也越来越受到重视。在蜱与宿主复杂关系中,蜱对宿主免疫反应的应对机制是蜱防控的研究重点之一。随着研究的逐步深入,发现蜱的多种蛋白因子参与对宿主免疫反应的调节作用,这些分子在蜱与蜱传病防治应用上和医药研究上都有很大价值,其中蜱的免疫球蛋白结合蛋白(IGBPs)就是这样的一类因子,已经发现其具有在蜱体内与宿主IgG结合并清除宿主IgG的作用,但其详细功能和作用机制仍不清楚。镰形扇头蜱是硬蜱总科扇头蜱属,在我国南方广泛分布。本实验室已经克隆了一种镰形扇头蜱免疫球蛋白结合蛋白(RH-IGBP),对其不同生长阶段的表达分布特点进行了RT-PCR分析,并对其抗蜱免疫保护性进行了检测,结果说明了其在蜱的各个阶段都有表达,具有一定的免疫保护性。为深入阐述IGBPs功能作用特点,本实验以RH-IGBP为对象,在已有研究的基础上,从五个方面展开工作。其一,对RH-IGBP进行大肠杆菌原核表达,利用表达重组蛋白制备抗体,收集吸血雌雄成蜱的各器官,对RH-IGBP性别和器官分布特点进行分析,结果显示其在吸血雄蜱中大量表达,以唾液腺为最丰富。其二,对RH-IGBP进行真核重组表达,研究重组真核蛋白与不同哺乳动物宿主(兔,猪,牛,羊,小鼠,犬)和人的IgG结合能力,发现IGBP与不同宿主IgG结合能力不同,与兔、猪的IgG有明显结合能力,与犬有一定结合能力,和羊,牛,小鼠结合能力更弱,与人的不表现结合能力。对来自兔源IgG不同酶切片段F(ab’)2和Fc与RH-IGBP结合特性分析表明,蜱IgG结合蛋白主要识别部位是IgG的F(ab’)2片段,但是随着浓度升高,Fc也表现出结合迹象。其三,用牛血清白蛋白BSA免疫实验兔,三免效价达到较高滴度后,饲喂镰形扇头蜱雌雄蜱叮咬吸血,每天解剖蜱取血淋巴,唾液腺和肠道,利用间接ELISA和Westernblot方法检测宿主IgG,证实了在镰形扇头蜱体内存在宿主IgG的运输、转移机制,同时发现于吸血第四天雄蜱唾液腺和血淋巴中检测到高浓度RH-IGBP,雌蜱仅在吸血第三天的唾液腺里检测到。其四,对RH-IGBP进行RNA干扰实验分析,利用RealtimePCR和Westernblot方法检测基因沉默效果,结果表明此基因实现沉默,而对蜱的饱血时间,饱血体重,产卵率和孵化率等参数进行统计,发现实验组与对照组均没有明显差别,提示我们IGBPs对蜱吸血和繁殖过程的直接影响不显著,或者存在其他代偿机制。最后,我们在璃眼蜱属的亚洲璃眼蜱中也克隆出了一个IGBP基因(HA-IGBP),此基因与RH-IGBP在基因序列上有80%的保守性,在氨基酸序列上有76%的保守性,具有信号肽和与固有免疫有关的结构,利用RealtimePCR对不同生长阶段蜱中HA-IGBP的表达进行分析,结果显示,其与RH-IGBP的表达特点相似,既吸血雄蜱表达丰度最高,不过HA-IGBP在吸血雌蜱里也表现很高丰度,这点与RH-IGBP以雄蜱为主的分布特点不同;另外HA-IGBP在吸血成蜱之前的几个阶段表达丰度均较低,而在未吸血幼蜱阶段相对较高,这点尚未在别的蜱种里得到验证。总之,在关于IGBP的研究进展整体较少的情况下,本实验为后续对IGBPs作用机制的更深入的解析提供了基础。