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目的:制备SF-CS-nHAp渐进性梯度孔径OC支架并完成其性能检测,以期为OC缺损的修复提供一种更加合适的仿生复合支架。方法:分别制备浓度分别为2%、3%、4%的SF溶液、CS溶液及nHA悬液,将相同浓度的材料等比例混合,分为支架-1(2%)、支架-2(3%)、支架-3(4%)三组。采用离心、真空冷冻干燥及化学交联法,经过三次塑形,制备出浓度不同的渐进性梯度孔径OC支架。分别检测各组支架一般情况、孔隙率、吸水膨胀率、压缩吸水膨胀率、热水溶失率、溶失后吸水膨胀率、力学性能、支架内部结构观察及孔径大小,并分析得出整体性能较好的支架。采用胶原酶消化法提取山羊ADSCs,通过免疫荧光法及流式细胞术对其进行鉴定,并通过CCK-8法检测ADSCs增殖活性。制备支架浸提液,通过CCK-8法检测不同时间段支架浸提液对ADSCs增殖活性的影响。将ADSCs种植在支架中构建成支架-ADSCs复合体,并通过CCK-8法检测支架-ADSCs复合体中各层细胞增殖情况,通过细胞核荧光染色法及SEM观察支架-ADSCs复合体中各层细胞分布及形态。结果:各组支架均呈白色,形状规则,近似为圆柱体,质量极轻,触之有一定的抗压能力及弹性。支架-1、支架-2、支架-3孔隙率分别为(91.30±3.35)%、(89.50±3.11)%、(82.58±1.47)%,支架-3孔隙率则低于另外两组(P<0.05);吸水膨胀率分别为(3218.53±84.37)%、(2573.83±132.51)%、(1969.50±90.01)%,并且随材料浓度增高而逐渐减小(P<0.05);压缩吸水膨胀率分别为(1587.27±63.09)%、(2379.53±77.04)%、(1989.53±118.90)%,与压缩前吸水膨胀率相比,支架-1明显降低(P<0.05),支架-2及支架-3无明显变化(P>0.05);热水溶失率分别为(16.57±3.18)%、(15.03±2.17)%、(15.65±0.68)%,各组间相比无明显差异(P>0.05),回归分析显示支架在体外完全溶失,分别需要65.85、60.92、73.86周;溶失后吸水膨胀率分别为(4267.15±132.31)%、(3192.30±223.41)%、(2807.70±235.16)%,与溶失前吸水膨胀率相比,三组支架溶失后吸水膨胀率均明显升高(P<0.05);弹性模量分别为(0.0955、0.1762、0.3468)MPa;SEM显示各组支架内部均呈现为蜂窝状,孔隙形状规则、互通,从支架成软骨侧到成骨侧孔隙分布逐渐密集、孔隙直径逐渐减小(P<0.05)。通过胶原酶消化法提取的ADSCs形态均一,形状似纺锤形,呈漩涡样生长,细胞增殖活性良好。流式细胞术鉴定ADSCs细胞表型结果显示CD29、CD90、CD44阳性表达率均为90%以上,而CD34、HLA-DR、IgG-Isotype control、Blank阳性表达率均小于5%,免疫荧光结果与流式鉴定结果一致。支架细胞毒性检测结果显示,不同时间段的支架浸提液对ADSCs的增殖活性均无明显影响,RGR值均大于90%,毒性评级均在0至Ⅰ级之间。支架-ADSCs复合体各层细胞在培养第3d后开始出现对数期增殖,第11d后进入平台期,在培养的第5-15d,复合体成软骨侧的细胞增殖活性稍高于成骨侧(P<0.05)。DAPI染色后可观察到支架各层内细胞分布均匀,细胞核形态大小均一,细胞核无明显异染及碎裂现象;SEM观察到支架-ADSCs复合体各层孔隙内壁上可见大量细胞粘附,细胞形态大小均一,呈长梭形紧密排列,未出现明显的细胞破碎或形态异常。结论:本研究成功制备出渐进性梯度孔径OC支架,支架各项物理性能良好,符合正常OC由软骨层向骨层的渐进性梯度结构。本研究成功提取纯度较高的ADSCs,并且成功构建支架-ADSCs复合体,经检测支架无细胞毒性并且生物相容性良好。综上,本研究所制备的SF-CS-nHAp渐进性梯度孔径OC支架及支架-ADSCs复合体,有望成为修复OC缺损的新型仿生复合支架材料。