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奶牛乳房炎是奶牛最为常见的一种疾病,严重制约着奶牛业的经济发展。该病不仅影响奶牛生产性能,还可经乳制品危害人类健康。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是引起奶牛乳房炎的主要病原之一,该菌易产生耐药及复发,给该病的防治带来困难。粘附素是该菌重要的毒力因子,能够识别结合宿主细胞,完成该菌感染初期对宿主细胞的粘附。凝集因子A(ClfA)、纤连蛋白结合蛋白(FnBPA)是S.aureus重要的粘附因子和抗原分子,对其预防具有重要价值。本研究以新疆地区牛源S.aureus的粘附素分子ClfA和FnBPA-A为研究对象,以本实验室构建的真核重组质粒pVAX1-C1fA和pVAX1-FnBPA-A,进行了这两种抗原免疫剂量,抗原组合的优化,分别免疫了小鼠和奶牛,评估该重组质粒对这两种动物的免疫效果。将小鼠免疫重组质粒ClfA和FnBPA-A后,分别检测了免疫后小鼠抗体水平;攻击保护率和肝、脾、肾脏的病理学变化。IgG检测结果显示,与对照组相比,ClfA+FnBPA-A联合免疫高剂量组小鼠的抗体效价可达1:12800;各免疫组抗血清对S.aureus均具有一定的识别结合能力,且联合免疫高剂量组的抗体对该菌的识别能力优于其余各组(P<0.01)。攻击保护率结果显示,ClfA低剂量、FnPA-A高剂量和ClfA+FnBPA-A低剂量免疫组的保护率为87.5%,FnBPA-A低剂量免疫组的保护率为75%,ClfA高剂量和ClfA+FnBPA-A高剂量免疫组对小鼠的攻击保护率可达100%。同时观察各组小鼠肝、脾、肾脏的病理组织学变化发现联合免疫高剂量组与正常对照组之间无明显差异,ClfA和FnBPA-A单独免疫组分别有不同程度的病理变化,小鼠脏器细菌载量结果显示联合免疫高剂量组细菌含量明显少于对照组,表明联合免疫高剂量组与其他组相比有良好的抗感染效果。将ClfA+FnBPA-A重组质粒免疫44头泌乳期奶牛,免疫后连续4个月监测免疫奶牛的抗体水平、细胞免疫水平、体细胞数、隐性乳房炎发病率、乳品质、菌体载量以及抗体维持时间等方面评估其免疫效果。结果表明ClfA+FnBPA-A联合组免疫后可诱导牛体产生良好的抗体水平(P<0.01),且联合免疫高剂量组血清抗体效价可达到1:3200;IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ细胞因子检测结果表明,联合免疫高剂量组血清中IL-2和IFN-γ水平明显高于其他免疫组(P<0.01),表明ClfA+FnBPA-A免疫组主要诱导Thl型细胞免疫应答;联合免疫高剂量组与其他免疫组和对照组相比,体细胞数、隐性乳房炎发病率显著下降,且联合免疫高剂量组免疫后奶牛的乳脂率、乳蛋白含量和乳糖含量明显高于其他免疫组和对照组(P<0.01);对牛乳中细菌载量检测结果显示,联合免疫高剂量组牛乳中菌落数为6×102个/mL,其他单独免疫组牛乳中菌落数为3.47×103～7.73×l03个/mL,空白对照组为3.73×104个/mL,ClfA+FnBPA-A高剂量免疫组牛乳中菌落数明显少于其他对照组(P<0.01)。本研究利用ClfA、FnBPA-A的重组质粒,进行了不同组合和免疫剂量的优化,分别以小鼠和奶牛进行免疫效果、牛乳品质和乳房炎发病率的比较,结果表明,联合免疫高剂量组可诱导实验动物产生良好的Th1型、Th2型免疫应答,对小鼠有良好的保护效果,可降低奶牛隐性乳房炎的发病率,改善乳品质。该研究结果为进一步开展新疆地区奶牛乳房炎的防控奠定了实验基础。