【摘 要】
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J亚型禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus，ALV-J)是上世纪80年代末从肉用型鸡中分离鉴定出来的新型外源性禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus，ALV)，严重影响了我国养
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J亚型禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus，ALV-J)是上世纪80年代末从肉用型鸡中分离鉴定出来的新型外源性禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus，ALV)，严重影响了我国养鸡业的健康发展。为了探讨ALV-J病毒在自身不携带癌基因情况下的致瘤机制，本研究采用miRNA芯片技术，筛选出人工感染ALV-J10周后SPF鸡肝脏中差异表达下调的miRNAs，通过生物信息学软件预测miRNA的靶基因，使用生物学实验方法对靶基因进行验证，并在细胞水平对各miRNA进行功能分析，获得的主要研究结果如下： 1.ALV-J人工感染SPF鸡10周后肝脏组织miRNA芯片表达谱分析表明：有7个显著下调的miRNAs。通过荧光定量PCR验证芯片结果的可靠性，发现两种实验方法的检测结果一致，表明本研究芯片结果准确可靠。 2.通过生物学信息软件对下调的miRNAs进行靶基因预测，荧光素酶检测结果表明：HMGA2和CYP39A1为gga-let-7i的潜在靶基因，YAP1为gga-mir-375的潜在靶基因。 3.Western blot结果进一步证明YAP1为gga-mir-375的靶基因。 4.WST-1细胞增殖实验和平板克隆实验结果表明：gga-mir-375和gga-let-7i对DF-1细胞的生长有明显抑制作用，gga-mir-125b对DF-1细胞的生长没有明显的影响。 5.动物攻毒试验表明：在ALV-J攻毒组，gga-mir-375和gga-let-7b在肝脏和骨髓组织中的肿瘤形成后期处于表达下调的趋势；而gga-let-7i只有在骨髓瘤攻毒组肝脏组织中从20天开始一直处于表达下调趋势；gga-mir-125b在骨髓组织中两种攻毒组从40天开始一直处于表达下调趋势。从靶基因mRNA的表达水平发现不了miRNA与靶基因的直接的靶标关系，但是对mRNA差异表达进行分析，对致病机理的了解有所裨益。 本研究利用miRNA芯片技术成功筛选出病理组和对照组差异表达下调的miRNA，初步揭示了下调的miRNA与ALV-J致瘤机制的关系，为J亚群禽白血病的致病与致瘤机理提供佐证，寻找分子标记与防控切入点，以期为将来的抗病育种和白血病品系净化等深入研究奠定基础。
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