柽柳组织培养及ThERF4基因抗逆功能分析

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ERF蛋白是AP2/EREBP转录因子家族的一大成员,在植物面对逆境胁迫中起重要调控作用。但目前对ERF基因在逆境中的功能研究尚不完全清晰,因此,研究柽柳ERF基因响应高盐和干旱胁迫的机理具有重要意义。首先,优化了瞬时转化体系,侵染液最佳组合为吐温0.05%(v/v)、乙酰丁香酮120 μmol/L和菌液OD600值1.0,该条件下转化基因的表达量最高。然后利用优化的转化体系,将柽柳不同ERF基因在烟草中瞬时过表达,并经盐、旱胁迫处理,通过抗逆生理学分析,筛选出了抗逆能力强的柽柳基因ThERF4作为进一步研究的对象。进一步将ThERF4基因瞬时转化柽柳,获得瞬时过表达及抑制表达的转基因柽柳,分别在盐、旱胁迫下进行生理生化指标的测定。DAB、NBT、伊文斯蓝的染色显示ThERF4基因具有良好的抗逆能力,其过表达能够减少逆境胁迫下ROS的积累及细胞膜的损伤,而ThERF4的抑制表达正好相反。进一步的生理指标实验显示ThERF4能够调控脯氨酸、SOD、POD、可溶性糖的含量,并减少胁迫下相对电导率、H202含量、MDA含量、失水率。说明ThERF4能够通过调控SOD、POD活性减少ROS积累,调控脯氨酸和可溶性糖的合成提高渗透势,来提高抗旱、耐盐能力。建立了柽柳的组培体系,发现了两种不同的6-BA和NAA激素组合的分化培养基能够促进柽柳茎段从脱分化、形成愈伤或形成不定根,到再分化,最终形成完整植株。
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