酸碱修饰柠檬果胶的中性糖结构分析及抑制半乳凝素-3活性的研究

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文献报道酸碱修饰的柠檬果胶(MCP)能与半乳凝素-3(Gal-3)相互作用,进而抑制Gal-3的抗凋亡和促血管生成作用,但在MCP中究竟是哪种活性成分起作用,以及活性成分的精细结构如何,还未见报道。本论文采用DEAE-Cellulose对MCP进行分离纯化,得到中性糖级分MCP-N和酸性糖级分MCP-A。MCP-N是一个分子量分布比较均一的级分,分子量约为20kD;MCP-A的分子量比较大,在SepharoseCL-6B凝胶柱上呈现较宽的分布。通过Gal-3诱导的红细胞凝集实验进行检测发现,MCP-N和MCP-A都具有抑制Gal-3的活性,其最小抑制浓度(MIC)分别为625μg/ml和0.5μg/ml。通过高效液相色谱、13C-核磁共振(13CNMR)和甲基化分析等方法综合鉴定了MCP-N的结构,结果表明,MCP-N属于阿拉伯半乳聚糖-I型果胶,其主链为β-1,4-galactan,少量的阿拉伯糖构成该分子的侧链。MCP-N用阿拉伯糖苷酶(α-L-arabinofuranosidase)酶解后,得到β-1,4-galactan(M-galactan)级分,分子量约为18kD,与Gal-3的相互作用明显增强,MIC值为50μg/ml。将M-galactan进行酸水解后得到分子量较小的寡聚半乳糖(M-galactan-oligo),其抑制活性较高,MIC值比M-galactan低5倍,与土豆半乳聚糖P-galactan(10.5μg/ml)的抑制活性相近。由此推测,MCP中的β-1,4-galactan与Gal-3的作用区域与末端残基有关,而与链的中间区域没有关系。本论文首次报道从MCP中分离得到了阿拉伯半乳聚糖片段和β-1,4-galactan片段,以及各级分对Gal-3的抑制活性。为阐明MCP的活性成分以及从中性糖中筛选Gal-3的抑制剂奠定了一定的理论基础。
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