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微管是细胞骨架的重要组分，参与完成许多重要的细胞生命活动。微管按照其细胞内分布模式可以分为两种，一种以中心体为成核中心呈辐射状分布，称为中心体微管;一种在细胞质中散在分布，在高度分化的细胞，如表皮细胞中沿着表皮细胞的顶部-基部极性轴(apico-basalaxis)分布，称为非中心体微管。目前已有的研究表明，微管参与到纺锤体形成、细胞分裂、细胞内物质运输和细胞极性迁移等重要的生命活动，由于目前对于微管的认识较为笼统地侧重于中心体微管，而对于非中心体微管的分布模式及生物学功能的研究，目前所知甚少。 2008年，非中心体微管负端蛋白Nezha的发现为深入了解非中心体微管提供了重要线索。Nezha蛋白点状分布在细胞质中并定位于细胞粘着小带处，它锚定于非中心体微管负端，将非中心体微管与细胞粘着小带相连，为微管负端运输的动力蛋白KIFC3运输至粘着小带提供轨道。 本实验前期研究发现，NezhaCC1结构域(第一个coiled-coildomain)可能与另一重要的微管相关蛋白ACF7(actincross-linkingfamily7)具有相互作用。ACF7能够调节微管的动态变化并引导微管沿肌动蛋白纤维向黏着斑处延伸，参与调节黏着斑的动态变化。进一步研究Nezha和ACF7蛋白的相互作用，探索二者的生物学功能以及二者互作的生理意义，可能对于解释非中心体微管负端锚定于细胞顶部表面膜(apicalsurface)的分布模式和深入研究非中心体微管参与的生命活动具有重要的启示意义。 本论文集中研究Nezha和ACF7蛋白的相互作用及二者互作的功能和意义，得到如下结果: 1.制备并获得效价良好的人类ACF7蛋白抗体，为后续ACF7蛋白细胞内定位及蛋白互作实验提供重要工具; 2.通过外源Pull-down和内源免疫沉降实验以及内外源免疫染色实验证实Nezha和ACF7蛋白的相互作用，找到二者相互作用的功能结构域，均为相关功能未报导的新的功能结构域; 3.通过蛋白过表达实验初步证实Nezha蛋白过表达会影响与之互作的ACF7蛋白片段的细胞内定位及内源ACF7蛋白的细胞内分布，推测Nezha对于ACF7可能具有募集作用; 4.通过siRNA干扰表达实验初步证实干扰ACF7蛋白表达会影响Nezha蛋白在细胞apicalsurface处的稳定性定位，推测ACF7可能具有锚定Nezha蛋白和非中心体微管负端在细胞apicalsurface定位的作用; 5.肌动蛋白网络解聚同样影响Nezha蛋白在细胞apicalsurface处的稳定定位，推测ACF7通过结合肌动蛋白网络结构稳定自身以及与之互作的Nezha蛋白的定位。 综上所述，本论文研究证实了Nezha与ACF7的相互作用，并初步论断ACF7能通过结合肌动蛋白网络以及与Nezha蛋白互作将Nezha和非中心体微管负端锚定于细胞apicalsurface，为进一步深入研究非中心体微管的生物学功能提供了宝贵线索。