【摘 要】
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目的:功能性便秘（Functional constipation,FC）是一种难治性慢性疾病,给患者带来严重困扰和经济负担。临床应用肠润方治疗功能性便秘具有较好疗效,能有效缓解便秘症状,但作用机制有待进一步阐明。本研究旨在探究肠润方对功能性便秘大鼠的治疗作用和相关分子机制。方法:采用复方地芬诺酯建立功能性便秘大鼠模型,将大鼠随机分为正常对照组（Control）、便秘模型组（Model）、麻仁丸阳性
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目的:功能性便秘（Functional constipation,FC）是一种难治性慢性疾病,给患者带来严重困扰和经济负担。临床应用肠润方治疗功能性便秘具有较好疗效,能有效缓解便秘症状,但作用机制有待进一步阐明。本研究旨在探究肠润方对功能性便秘大鼠的治疗作用和相关分子机制。方法:采用复方地芬诺酯建立功能性便秘大鼠模型,将大鼠随机分为正常对照组（Control）、便秘模型组（Model）、麻仁丸阳性药物组（Maren Pills）以及肠润方高剂量（High dose,22 g/kg/天）、中剂量（Medium dose,11 g/kg/天）、低剂量（Low dose,5.5 g/kg/天）组,各组在造模和肠润方干预后,分别检测首次黑便排出时间、排便粒数和总重量等指标;通过Western blot和RT-qPCR检测Cajal 间质细胞（Interstitial cells of Cajal,ICCs）的标志性蛋白 c-KIT、SCF,以及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（Hyperpolarization-activated cyclicnucleotide-gated cation channel,HCN）-1、HCN2 的 mRNA 和蛋白表达水平变化;通过免疫组化检测c-KIT和SCF的表达和分布情况;采用免疫荧光观察 HCN1 与 c-KIT、P 物质（Substance P,SP）、血管活性肠肽（Vasoactive intestinal polypeptide,VIP）的表达和共定位情况;采用多导生理记录仪检测肠润方水提液对大鼠离体结肠张力、收缩波振幅的影响。结果:与正常组相比,便秘模型组首次黑便排出时间显著延长,排便粒数显著减少,排便总重量显著下降;与模型组相比,肠润方各剂量组和麻仁丸组均缩短便秘大鼠首次黑便排出时间,增加排便粒数和总重量。RT-qPCR和WB检测结果显示,相比于正常组,模型组结肠c-KIT、SCF、HCN1、HCN2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低;与模型组相比,不同剂量肠润方组和麻仁丸组c-KIT、SCF、HCN1、HCN2的mRNA水平和蛋白水平均有上调。免疫组化结果显示,相比于正常组,模型组ICCs体积较小、排列稀疏,c-KIT、SCF表达显著减少,而肠润方和麻仁丸治疗组上述指标均得到不同程度改善。免疫荧光结果显示HCN1与c-KIT、SP、VIP均能够共定位,且模型组的HCN1、c-KIT、SP荧光强度相比于正常对照组显著减弱,而VIP荧光强度则显著增强。离体肠管运动实验结果显示,不同浓度肠润方水提液均可改善地芬诺酯所致的大鼠离体结肠张力的下降,同时提高收缩波振幅。肠润方对便秘的治疗作用和对相关分子表达水平的影响,呈现出一定剂量依赖性,高剂量组作用最显著。结论:肠润方可兴奋大鼠离体结肠平滑肌,增强结肠运动功能,改善功能性便秘大鼠胃肠动力传输障碍及相应便秘症状。其具体机制可能与上调c-KIT、SCF以及HCN通道表达水平,维持结肠ICCs正常发育和胃肠慢波起搏与传导功能,并且促进胃肠调节肽SP表达和下调VIP水平,加强结肠平滑肌收缩,促进结肠运动有关。
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