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第一部分:早期脂多糖干预对大鼠树突状细胞表型和功能的影响
目的：研究不同时期给予脂多糖(LPS)干预时树突状细胞(DC)表型和功能的变化，探讨早期LPS干预对大鼠骨髓源性DC表型和功能的影响。
方法：用重组大鼠白细胞介素(rrIL)-4和重组大鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)体外诱导骨髓前体细胞，成熟组于第6天加入LPS1μg/ml，干预组分别于第0、3、6天加入LPS1μg/ml，对照组不加LPS，培养过程连续观察细胞形态学变化，第7天收集细胞。采用扫描电镜和透射电镜进一步观察其形态学变化。
结果：第6天加入LPS可明显促进DC树枝样突起的形成，而LPS早期干预则抑制这种形态的改变。与对照组相比，干预组DC的MHCⅡ、CD80、CD86、IL-12p35mRNA的表达和刺激同种异体T淋巴淋巴细胞增殖的能力显著降低，而成熟组明显增高；干预组DC摄取抗原Dextran的能力显著增高而成熟组明显降低。
结论：早期LPS干预可抑制大鼠骨髓源性DC的成熟，获得纯度更高的未成熟DC，为进一步研究免疫耐受奠定了基础。
第二部分体外未成熟树突状细胞对T细胞活化和分化及功能的影响
目的：观察不同成熟状态的树突状细胞(DC)对T淋巴细胞增殖及干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-12、IL-10和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响，探讨未成熟DC对T淋巴细胞活化和分化及功能的影响。
方法：用rrIL-4和rrGM-CSF体外诱导大鼠骨髓前体细胞，通过LPS干预，获得未成熟和成熟两种状态的DC(iDC和mDC)。将两种DC给予乙酰胆碱受体(AChR)负载后分别进行同基因T淋巴细胞重复刺激试验，通过细胞计数和MTT法检测重复刺激过程中T淋巴细胞增殖情况。
结果：(1)AChR负载的mDC初次和重复刺激均能诱导强烈的T淋巴细胞增殖，而AChR负载的iDC则明显抑制T淋巴细胞增殖。(2)AChR负载的mDC重复刺激3个循环后的T淋巴细胞对AChR负载的iDC的刺激可引起较弱的增殖反应，而AChR负载的iDC重复刺激3个循环后的T淋巴细胞对AChR负载的mDC的刺激不引起增殖。(3)AChR负载的mDC和iDC重复刺激3个循环后的T淋巴细胞均能对无关抗原OVA负载的mDC的刺激产生明显增殖，但前者增殖反应更强。(4)AChR负载的mDC初次和重复刺激均引起T淋巴细胞IFN-γ和IL-12p35mRNA的表达增强，而TGF-β1和IL-10mRNA的表达无明显变化；AChR负载的iDC初次和重复刺激则引起T淋巴细胞TGF-β1和IL-10mRNA的表达增强，而IFN-γ和IL-12p35mRNA的表达无明显变化。
结论：体外AChR负载的iDC可诱导同基因T淋巴细胞耐受，耐受机制可能包括抗原特异性T淋巴细胞无能和非抗原特异性调节性T细胞的产生，并与Th1相关细胞因子IFN-γ和IL-12的抑制和免疫调节性细胞因子TGF-β1和IL-10的上调有关。
第三部分:未成熟树突状细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠病情的影响
目的：观察不同成熟状态的树突状细胞(DC)接种后的大鼠在用乙酰胆碱受体(AChR)和完全弗氏佐剂(CFA)主动免疫时，其重症肌无力(MG)相关指标的变化，探讨未成熟DC对实验性自身免疫性MG(EAMG)病情的影响。
方法：用rrIL-4和rrGM-CSF体外诱导大鼠骨髓前体细胞，通过LPS干预，获得未成熟和成熟两种状态的DC(iDC和mDC)；部分给予AChR负载后分别接种同基因Lewis大鼠，对照组接种1ml无血清培养基。3周后用AChR和等量CFA二次免疫的方法复制EAMG大鼠模型，正常组不作任何处理。连续观察大鼠行为学变化，采用盲法进行MG样症状评分；并于初次免疫后第7周采用低频重复电刺激观察其电生理改变、采用酶联免疫吸附试验检测其血清抗-AChR抗体(AChRab)水平的变化、采用光镜和透射电镜观察其神经肌肉接头的病理学改变。
结果：接种iDC、mDC、AChR负载的mDC的大鼠和对照组一样，用AChR和CFA初次免疫4周后，全部相继出现不同程度的毛发干枯、摄食减少、体重下降、活动减少、嘶咬无力且易疲劳等MG样症状，7周左右达到高峰，评分1～3分；第7周时，其重复电刺激出现明显衰减、血清AChRab滴度明显增高、神经肌肉接头呈现典型的MG样改变。而接种AChR负载的iDC的大鼠仅有1只出现轻微的肌无力表现(评分1分)，其余4只始终未见任何肌无力样症状；第7周时，其肌电图衰减率、血清AChRab滴度、神经肌肉接头的病理改变与正常组比较均无明显变化。
结论：AChR负载的iDC可抑制体内致病性AChRab的产生，避免神经肌肉接头的病理损害，诱导EAMG耐受。
第四部分未成熟树突状细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠T淋巴细胞细胞因子分泌模式的影响
目的：观察不同成熟状态的树突状细胞(DC)接种后的大鼠在用乙酰胆碱受体(AChR)和完全弗氏佐剂(CFA)主动免疫后，其脾脏T淋巴细胞干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-12、IL-10和转化生长因子(TGF)-β1表达的变化，探讨未成熟DC对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠T淋巴细胞细胞因子分泌模式的影响。
方法：用rrIL-4和rrGM-CSF体外诱导大鼠骨髓前体细胞，通过LPS干预，获得未成熟和成熟两种状态的DC(iDC和mDC)；部分给予AChR负载(AChR+iDC和AChR+mDC)后分别接种同基因Lewis大鼠，对照组接种1ml无血清培养基。3周后用AChR和等量CFA二次免疫的方法复制EAMG大鼠模型，正常组不作任何处理。
结果：(1)与正常组比较，对照组、iDC组、mDC组和AChR+mDC组大鼠T淋巴细胞IFN-γ蛋白和IL-12p35mRNA的表达均显著增加，而AChR+iDC组均无明显变化，并显著低于对照组、iDC组、mDC组和AChR+mDC组。(2)与正常组比较，对照组、iDC组、mDC组、AChR+iDC组和AChR+mDC组大鼠T淋巴细胞TGF-β1蛋白和IL-10mRNA的表达均显著增加，TGF-β1的表达在AChR+iDC组增高尤为明显。
结论：EAMG大鼠脾脏T淋巴细胞IFN-γ、IL-12、IL-10和TGF-β1的表达均明显增高，AChR负载的iDC可抑制体内IFN-γ和IL-12的表达而促进IL-10和TGF-β1的表达并诱导EAMG耐受。提示AChR负载的iDC诱导EAMG耐受可能与调节性细胞因子IL-10和TGF-β1的表达上调而Th1相关细胞因子IFN-γ和IL-12被抑制有关。
第五部分:白细胞介素-12和激发型CD40单克隆抗体对实验性自身免疫性重症肌无力耐受的影响
目的：观察未成熟树突状细胞(iDC)诱导实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)耐受时，给予Th1细胞激活因子白细胞介素(IL)-12或DC促成熟剂激发型CD40单克隆抗体(CD40mAb)干预后大鼠MG相关指标的变化，探讨IL-12和CD40对未成熟DC诱导EAMG耐受的影响，进一步揭示DC在MG发病机制中的作用。
方法：用rrIL-4和rrGM-CSF体外诱导大鼠骨髓前体细胞，通过LPS早期干预，获得iDC；给予AChR负载后接种同基因Lewis大鼠，EAMG对照组接种1ml无血清培养基。其中IL-12组中每只大鼠在接种DC的同时和次同分别给予rrIL-12腹腔注射，200ng/次；CD40mAb组中每只大鼠在接种DC的同时和次同分别给予激发型CD40mAb腹腔注射，0.5mg/次。3周后用AChR和等量CFA二次免疫的方法复制EAMG大鼠模型，正常组不作任何处理。连续观察大鼠行为学变化，采用盲法进行MG样症状评分；并于初次免疫后第7周采用低频重复电刺激观察其电生理改变、采用酶联免疫吸附试验检测其血清抗-AChR抗体(AChRab)水平的变化、采用光镜和透射电镜观察其神经肌肉接头的病理学改变。
结果：(1)给予AChR和CFA免疫后，耐受组仅有1只大鼠在初次免疫5周后出现轻微的肌无力表现(评分1分)，其余4只始终未见任何肌无力样症状；第7周时，其肌电图衰减率、血清AChRab滴度、神经肌肉接头的病理改变与正常组比较均无明显变化。(2)和EAMG对照组一样，IL-12组和CD40mAb组大鼠在初次免疫4周后，全部相继出现不同程度的毛发干枯、摄食减少、体重下降、活动减少、嘶咬无力且易疲劳等MG样症状，7周左右达到高峰，评分1～3分；三组大鼠在第6周和第7周的EAMG评分均显著高于正常组和耐受组；而IL-12组和CD40mAb组与EAMG对照组比较无显著差异。第7周时，与正常组和耐受组比较，其肌电图衰减率和血清AChRab滴度显著增高，神经肌肉接头呈现典型的MG样改变。
结论：Th1细胞激活因子IL-12和DC促成熟剂激发型CD40mAb可打破AChR负载的未成熟DC诱导的EAMG耐受，促进EAMG的发生；提示DC功能异常和外源性DC促成熟剂可能在MG异常免疫反应的启动机制中具有重要作用。