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目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在体外模拟的肿瘤微环境中是否受到其中过度表达的致瘤性酪氨酸激酶信号分子的影响而发生恶性转化，进而为日后如何在特定的微环境中有效的规避这些炎症相关的信号分子对MSCs的影响,安全有效地利用MSCs提供一定的前期理论基础和实验依据。材料与方法1.细胞培养：取Wistar大鼠的股骨和胫骨骨髓，贴壁筛选法体外分离、培养、扩增MSCs；取新生Wistar大鼠的大脑皮层组织，体外分离，培养和扩增星型胶质细胞：C6胶质瘤细胞来源于儿研所肿瘤研究室，三种细胞用相同的DEME/F12培养基进行培养。2.实验分组：本实验分筛选实验和验证实验两部分，筛选实验部分设为实验组，对照组和空白对照组三组。实验组为C6胶质瘤与MSCs间接共培养模拟肿瘤微环境下MSCs的生长；对照组为星型胶质细胞与MSCs间接共培养模拟正常微环境下MSCs的生长；空白对照组为MSCs单独培养。验证实验分二组：对照组(正常微环境中IL-6处理的MSCs作为正常对照组)，实验组（肿瘤微环境中过量表达的IL-6处理的MSCs为实验组）。3.实验方法：第一部分：筛选实验1) Olympus倒置相差显微镜下连续观察各实验组细胞形态的变化。2)采用荧光定量聚合酶链反应和免疫荧光检测各组的P53和MDM2的基因和蛋白的表达。3) ELISA检测各组HGF、IL-6、BFGF的表达。4)免疫荧光检测对应升高的细胞因子作用于MSCs后的STAT3蛋白的表达。第二部分:验证实验1)肿瘤微环境中过量表达的IL-6处理的MSCs为实验组，正常微环境中IL-6处理的MSCs作为正常对照组。细胞生长曲线检测各组MSCs的增殖能力变化。2)细胞生长曲线检测各组MSCs的增殖能力变化。3)免疫荧光定量PCR和Western Blot检测各组MSCs的P53和MDM2的蛋白变化。。4)裸鼠成瘤实验检测各组MSCs体内成瘤的能力。结果第一部分：致MSCs瘤化相关因子筛选1.第4代纯化的MSCs形态均一，呈纤维细胞样。纯化后的星型胶质细胞主要呈星型，细长并有分支。C6胶质瘤细胞细长，排列紧密，细胞核质比大。实验组共培养1周后MSCs细胞形态与对照组比较变化比较明显，细胞异型性明显，核质比增大。对照组细胞形态变化不明显，呈成纤维细胞样排列。2.培养一周后实验组的p53mRNA的相对表达量为0.55±0.10，与对照组相比表达明显降低（P＜0.01）；实验组的mdm2mRNA相对表达量为1.56±0.21，是对照组的1.56倍，表达显著升高（P＜0.01）；对照组的P53mRNA的表达量是空白对照组的1.10±0.16倍，两者之间没有统计学差异（p>0.05）；对照组的mdm2mRNA的是空白对照组的1.20±0.25倍，两者之间没有统计学差异（p>0.05）。3.实验组大部分的细胞表达P53突变蛋白，达到87±5%，而对照组表达率0%（p<0.01）。实验组大部分的细胞表达MDM2，主要分布于细胞核，阳性率为90±7%，而对照组表达率为0%（p<0.01）。4.实验组的酪氨酸激酶信号分子HGF、IL-6水平与对照组和空白对照组比较表达水平升高（p<0.01），而BFGF表达与对照组和空白对照组之间比较无明显的差异（p>0.05）；对照组的HGF、IL-6、BFGF表达与空白对照组之间比较无明显的差异（p>0.05）。5.过量IL-6处理组的STAT3激活蛋白表达率90%±7%，显著高于对照组STAT3激活蛋白的表达率0%（P<0.05）。第二部分:IL-6促MSCs瘤化作用验证1.白介素6处理MSCs1个月后，实验组和对照组之间的生长曲线无明显的差异，而两个月后实验组和对照组的生长曲线有明显的差异。２个月后实验组MSCｓ生长接触抑制明显减弱，呈现肿瘤化。2.2个月后，实验组p53mRNA的相对表达量为0.17±0.07，与对照组相比表达降低，两组间的差异有统计学意义（P＜0.01）；实验组mdm2mRNA相对表达量为2.64±0.5，与对照组表达明显升高（P＜0.01）。3.Western blot检测P53、MDM2蛋白结果显示:2个月后实验组P53蛋白表达水平为0.33±0.11，而对照组P53蛋白水平是0.10±0.03，实验组显著低于对照组（P＜0.05）。MDM2蛋白的表达水平由对照组的0.23±0.09增加到实验组的0.73±0.14，两组间有显著差异（P＜0.05），说明实验组细胞中发生了P53蛋白的减低和MDM2蛋白的扩增。4.接种3个月后，可见实验组裸鼠接种部位有肿块生长，而对照组没有。实验组HE染色结果显示，接种部位可见大量无定形生长的肿瘤细胞，细胞排列紊乱，并伴有坏死。对照组HE染色结果显示，接种部位无肿瘤的生长，仍然保留正常肌肉的染色结构。结论1.体外模拟的肿瘤微环境中过量表达的致瘤性酪氨酸激酶信号分子可以促使MSCs可以获的肿瘤细胞的生物学特性。2.微环境中过量表达的IL-6可以促使MSCs发生恶性转化，并且恶性转化的MSCs植入裸鼠体内能够形成肿瘤。