【摘 要】
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目的本课题的主要内容研究LPS诱导急性肾损伤的机制,探讨铁死亡是否介导LPS诱导的急性肾损伤及线粒体活性氧在其中的作用。方法本课题研究内容主要分为体内实验和体外实验,体内实验大概由三个实验构成。体外实验大概由两个实验构成。实验一、将36只雄鼠根据体重S形分组,分为对照组和LPS组,对照组90%射生理盐水,LPS组注射2.0mg/kg的大肠杆菌菌属的细菌脂多糖,6h、24h收集小鼠的肾脏和血液。生化
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目的本课题的主要内容研究LPS诱导急性肾损伤的机制,探讨铁死亡是否介导LPS诱导的急性肾损伤及线粒体活性氧在其中的作用。方法本课题研究内容主要分为体内实验和体外实验,体内实验大概由三个实验构成。体外实验大概由两个实验构成。实验一、将36只雄鼠根据体重S形分组,分为对照组和LPS组,对照组90%射生理盐水,LPS组注射2.0mg/kg的大肠杆菌菌属的细菌脂多糖,6h、24h收集小鼠的肾脏和血液。生化仪检测小鼠肾功能指标BUN、UA、Scr;检测小鼠肾脏组织中的GSH、MDA的含量;检测小鼠肾脏组织中的总铁的含量;TUNEL实验检测肾脏细胞死亡;GPX4、4HNE等指标检测小鼠肾脏细胞铁死亡;TEM观察线粒体形态。实验二、将48只小鼠根据体重S形分组分为4组,对照组90%射生理盐水,LPS组注射2.0mg/kg的大肠杆菌菌属的细菌脂多糖,Fer-1组注射5mg/kg Fer-1,LPS+Fer-1组预前一个小时注射Fer-1然后注射LPS,24h后收集小鼠肾脏。生化仪检测小鼠肾功能指标BUN、UA、Scr;检测小鼠肾脏组织中的GSH、MDA的含量;TUNEL实验检测肾脏细胞死亡;TEM观察线粒体形态。4HNE等指标检测小鼠肾脏细胞铁死亡;TEM观察线粒体形态。实验三、将48只小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,LPS和LPS+Mito Q组注射2mg/kg LPS,Mito Q和LPS+Mito Q组注射5mg/kg Mito Q,Mito Q是预前1h注射,24h后收集小鼠肾脏,生化仪检测小鼠肾功能指标BUN、UA、Scr;检测小鼠肾脏组织中的GSH、MDA的含量;TUNEL实验检测肾脏细胞死亡;GPX4、4HNE等指标检测小鼠肾脏细胞铁死亡;TEM观察线粒体形态。体外实验一、HK-2细胞培养基中加入5ug/ml LPS,检测线粒体活性氧荧光;检测细胞内脂质活性氧;检测细胞死亡;检测线粒体活性氧;流式细胞术检测线粒体ROS、线粒体膜电位和胞质游离铁水平。体外实验二、Mito Q干预检测线粒体活性氧、细胞死亡等指标。结果雄性CD-1小鼠腹腔注射LPS（2.0 mg/kg）。脂质过氧化的两种标记物—肾脏MDA和4HNE水平,在LPS暴露的小鼠中增加。LPS处理的人HK-2细胞中检测到氧化脂质。在体内,肾皮质细胞出现线粒体体积减小、核固缩、线粒体变小等铁死亡特征的超微结构改变。在体外,LPS处理的人HK-2细胞线粒体膜电位发生异常改变。Fer-1是铁死亡特异性抑制剂,可降低LPS诱发的肾脂质过氧化、铁死亡特征的线粒体损伤和肾细胞死亡。机制上,LPS刺激的HK-2细胞中线粒体来源的ROS升高。Mito Q是一种线粒体靶向抗氧化剂,几乎完全清除了人HK-2细胞中LPS刺激的线粒体ROS。此外,Mito Q预处理可减弱LPS诱导的GSH耗竭和小鼠肾脏脂质过氧化。最后,Mito Q预处理可减轻LPS诱导的肾细胞死亡和急性肾损伤。综上所述,这些结果表明在脂多糖诱导的中急性肾损伤,线粒体来源的ROS至少部分参与了肾细胞铁死亡。线粒体靶向抗氧化剂可能是治疗LPS诱导的急性肾损伤的潜在药物结论在脂多糖诱导的中急性肾损伤,线粒体来源的ROS至少部分参与了肾细胞铁死亡。线粒体靶向抗氧化剂可能是治疗LPS诱导的急性肾损伤的潜在药物
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