EB病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）是一种人类疱疹病毒，全世界95％以上的人群在儿童就已感染。它是传染性单核细胞增多症的病因，也与多种重要的人类癌症相关，如Burkitt’s淋巴瘤（BL）、鼻咽癌（NPC）及何杰金氏淋巴瘤等。在人类，已在上述肿瘤细胞中检出4种EB病毒相关蛋白，其中EB病毒膜抗原gp340能引起保护性的中和抗体产生、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）和特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）杀伤作用。因此，gp340作为预防EB病毒原发感染的候选疫苗受到了广泛重视。 树突状细胞（dendritic cells，DCs）是体内最有效的抗原提呈细胞，同单核细胞、巨噬细胞统称为人体的“哨卫系统”（custocyte system）。树突状细胞能在体内外直接激活初始T淋巴细胞，在激发T淋巴细胞免疫应答及T淋巴细胞依赖性抗体生成中起重要作用。近来研究表明，应用抗原或抗原多肽在体外冲击致敏DCs，可有效地诱导抗肿瘤免疫反应。本研究中我们通过体外实验研究了用GM-CSF+TNF-α+IL-4+IL-3的细胞因子组合从人骨髓CD34~+造血干/组细胞诱导、分化DCs及鉴定，并进行了DCs负载EB病毒膜抗原gp340诱导特异性CTLs杀伤EB病毒相关肿瘤细胞的实验研究。拟为EB病毒相关肿瘤的治疗提供一条新途径。主要结果如下： 1．采用Mini-MACS分离技术可以从正常人骨髓分离得到高纯度（＞90％）的CD34~+造血干/祖细胞，且回收率（90％左右）和活细胞率（＞95％）均很高，这种方法为进一步获得较纯净DCs提供了保证，符合临床肿瘤生物治疗时制备大量高纯度DCs的需要，值得推广。 2．经 GM－CSF＋TNF－a＋IL4的共同诱导培养，可以促进骨髓中 CD34“造血干／祖细胞向 DCS分化，在 14天内可以诱导。分化扩增出大量成熟的 DCS，最终可获得的 DCS为初始干细胞量的 5～10倍，加入 IL－3可进一步增加 DCS的产量。 3．我们对扩增得到的DCS从三个方面加以鉴定，①形态观察；DCS形态呈多形性，表面粗糙有不规则突起，胞浆中细胞器丰富，富含线粒体：②表面标志的检测：＊Q高水平表达＊D；＊③同种异型混合淋巳细胞反应：DCS可诱导同种异型T淋巴细胞产生明显的增殖反应。因此，根据 Sornasse D等提出的判别标准，可以认定：我们从人骨髓细胞中诱导扩增出的细胞是具有良好刺激活性的DCS细胞，而且无菌。无污染，可用于持续培养，能达到后续实验的要求。 4．我们根据文献报道设计了EB病毒表面膜糖蛋白gp340负载DCS的方法，结果发现DCs加工处理抗原后激发T淋巴细胞增殖反应的能力进一步增强，同时也说明通过本方法获得的DCS具有极强的抗原提呈能力。 5．在进行EB病毒相关性肿瘤细胞的杀伤实验中，只有负载了抗原gp340的DCS，才能刺激特异性CTLS杀伤EB病毒相关性肿瘤细胞；在无DCS条件下，仅有T淋巴细胞和抗原gp340，由于缺乏DCS抗原提呈并刺激T淋巴细胞产生特异性CTLS，故在细胞杀伤试验中T细胞不具有杀伤肿瘤细胞的能力；同时，DCS如无抗原呈递的对象，其本身是不能刺激T淋巴细胞产生特异性CTLS的，故在细胞杀伤试验中杀伤肿瘤细胞的效率极低。结论与展望： 1．EB病毒膜抗原能够诱导病毒中和抗体的产生，中和 EB病毒感染和对B细胞的转化活性，还可介导抗体依赖的细胞毒作用及刺激T细胞产生细胞介导的免疫应答，这一过程中抗原提呈细胞发挥了重要作用。我们的实验证实了以EB病毒膜抗原gp340为主要成分控制EB病毒感染的EB病毒疫茵可有效激发兔疫应答，其中DCS提呈膜抗原gp340可能是EB重庆市院士基金资助项目，项目号：637·Vll· ）病毒疫苗发挥作用的机理之一，我们的工作从一个方面为EB病毒疫苗接种策略提供了实验依据，相信在不远的将来以gp340为主要成分的EB病毒疫苗会进入市场并运用于临床。 2．以控制EB病毒感染的疫苗致敏DCS，能促进抗原提呈并启动抗肿瘤免疫，体外可有效杀伤EB病毒相关肿瘤细胞，从科学和商业上考虑，随着EB病毒疫苗的开发上市，DCS疫茵作为一种针对EB病毒相关性肿瘤的新型治疗性疫苗，将会有着良好的研究价值和开发前景。