热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)作为一种分子伴侣，参与蛋白的正确折叠、聚合、转运和信号传递等重要生理过程。近年来，HSPs已应用于神经退行性疾病、心血管疾病、肿瘤等疾病的防治。HSPs的表达主要受热休克转录因子1(heatshock transcription factor1，HSF1)调控的。　　 由于野生型HSF1的活化需要三聚化及磷酸化修饰，限制了它的应用。因此，人们对HSF1基因进行了缺失突变和点突变等改造，使其在非应激条件下具有转录活性。BS是缺失203至315氨基酸残基的正显性热休克因子1突变体。　　 作为一种生物大分子，HSF1蛋白很难进入细胞。大量研究表明，蛋白转导域TAT可以将分子量达120KD的蛋白质有效地导入细胞内；TAT具有广谱的蛋白转导作用，几乎可以进入所有的细胞，甚至可以穿过血脑屏障，为研究蛋白质传送提供了有力的工具。　　 本文拟在通过TAT介导热休克转录因子1突变体——BS进入细胞，并研究BS在细胞中的作用。1、构建TAT-GFP融合蛋白的原核表达载体，并进行大量表达和纯化。结果证实TAT-GFP能够有效地进入Hela、A549、NIH3T3等稳定细胞株中，且在荧光显微镜下激发产生荧光。2、在TAT-GFP构建成功的基础上，构建N-端TAT-BS融合蛋白表达载体。对其进行纯化后，加到细胞培养基中，发现TAT-BS在细胞表面形成了一层网状物。然后构建pcDNA-TAT-BS，双荧光检测TAT-BS不能激活HSP70B-luc的活性。由此推测TAT可能影响了BS的结构，从而影响其功能的发挥。3、鉴于BS的结构和功能与TAT的关系，决定将TAT构建到BS的C-端。结果证实在真核系统里，BS-TAT能够激活HSP70B，其活性与BS相当。原核表达的BS-TAT融合蛋白在加入细胞培养基中一段时间后可以进入细胞，通过对提取的核蛋白的检测，发现在细胞核中可以检测到BS-TAT融合蛋白，并能够激活HSP70。