烯效唑和多效唑是一类抑制植物生长的调节剂,广泛应用于农产生产中。现有研究表明,长期使用及滥用烯效唑和多效唑,将会对人类健康造成一定影响。因此,发展食品中烯效唑和多效唑残留检测新技术,对保障食品品质安全具有重要的现实意义。本文研究制备了抗烯效唑单克隆抗体,在此基础上,研究构建了食品中烯效唑免疫分析新方法;结合本实验室前期获得的抗多效唑单克隆抗体,研究构建了食品中多效唑免疫分析新方法。应用所建立的分析方法对食品中的烯效唑、多效唑进行检测,取得了较好的效果。其主要研究成果如下:1.运用琥珀酸酐法制备烯效唑半抗原,并通过N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将半抗原分别与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联,进而制备新的、有效的烯效唑免疫原和检测原。采用质谱、红外光谱、紫外吸收光谱、核磁氢谱、高效液相色谱、MALDI-TOF/MS等多种分析技术对所制备的烯效唑半抗原及人工抗原的结构进行鉴定,同时将所制备的免疫原对小鼠进行免疫,以探究其免疫原性。结果表明,烯效唑人工抗原合成成功,免疫原和检测原的偶联比分别为21.8:1和6.0:1,且所免疫的小鼠能产生相应的应答,效价可达到80000,IC50=105.63 ng/mL,为其单克隆抗体的进一步制备以及食品中烯效唑残留检测的免疫学方法的构建奠定了较好的研究基础。2.应用所制备的烯效唑免疫抗原对小鼠进行免疫,得到高效价的小鼠脾脏,将脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫法和间接竞争酶联免疫法进行阳性筛选。经亚克隆,得到18株能稳定分泌抗烯效唑单克隆抗体的细胞株,综合效价与特异性的考虑,最终选定的细胞株为1B11-G11-D10-C11-A7。该细胞株亚型为IgG2b,轻链类型为IgK。将其接种于Balb/c小鼠腹腔,得到的腹水中抗体效价为128000,IC50为11.26 ng/mL,与类似物多效唑的交叉反应率为1.53%。3.在获得抗烯效唑单克隆抗体的基础上,通过对抗原的包被液、包被条件、标准品稀释液、竞争模式等反应条件的优化,研究建立了基于抗烯效唑单克隆抗体的烯效唑酶联免疫快速分析方法,其IC 50值为5.0 ng/mL,检测限IC20:1.47 ng/mL-IC80:97.25 ng/mL。与烯效唑类似物的交叉反应率均小于2%,具有很高的特异性。对大豆、脐橙的加标回收率分别为86.0-114.7%、86.6-100.5%,可用于食品中烯效唑残留的快速检测。4.在前期获得抗多效唑单克隆抗体的基础上,分别通过琥珀酸酐法与4-(溴甲基)-苯甲酸法制备了多效唑检测抗原,经性能分析对比发现,相比基于琥珀酸酐法合成抗原的酶联免疫分析体系,基于4-(溴甲基)-苯甲酸法合成抗原的酶联免疫分析体系灵敏度提升了 6倍,为通过检测抗原的改造优化来提高多效唑免疫分析体系的灵敏度提供了一种新的方法。在此基础上,本研究还通过抗原包被液、反应时间、竞争模式等反应条件的优化,建立了基于抗多效唑单克隆抗体的多效唑酶联免疫快速分析方法,其IC50值为54 ng/mL,检测限IC20:13.4 ng/mL-IC80:212.7ng/mL,与多效唑类似物的交叉反应率均小于2%,具有很高的特异性。对苹果、脐橙的加标回收率分别为83.2-96.4%、88.9-94.6%,可较好地满足食品样品中多效唑残留快速分析的要求。