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目的:胚胎着床是复杂的程序化的生理过程,它包括一系列发生在胚胎与子宫之间的同步协调的变化。着床始于游离子宫上皮细胞和胚泡之间的识别,进行定位并黏着,随后胚泡的滋养外胚层细胞穿透子宫内膜的表面,胚泡进而植入子宫基质。
Lewis Y(LeY)抗原,是双岩藻糖基化的寡糖[Fucl→2Galβ1→4(Fuc1→3)GlcNAcβ1→R]。LeY抗原主要见于发育早期的胚胎、内皮细胞以及中性粒细胞。FUT4催化了LeY的合成的最后一步反应,因此是LeY合成的关键酶。
本文主要研究FUT4及LeY寡糖抗原的表达及其在两种接受态子宫内膜中的作用的调控进行对比和分析。
方法:本文选取代表高接受态的子宫内膜细胞(RL95-2细胞系)与低接受态的子宫内膜细胞(HEC-1A细胞系),应用了RT-PCR、Western Blot方法检测FUT4在两种细胞中的表达情况;应用细胞转染实验,将FUT4过表达质粒转染至RL95-2细胞,将FUT4干扰质粒转染至HEC-1A细胞,并在免疫组化实验中,通过对FUT4的表达进行调控后来检测RL95-2细胞及HEC-1A中FUT4,LeY的表达情况;采用细胞黏附实验分别观察人胚胎细胞(JAR cell)与高接受态和低接受态子宫内膜细胞的黏附率,同时将FUT4过表达质粒转染至RL95-2细胞,将FUT4干扰质粒转染至HEC-1A细胞,观测经转染FUT4不同质粒后的子宫内膜细胞与JAR细胞的黏附情况,最后分别向两种细胞中加入LeY特异性抗体AH6,进一步检测LeY与两种不同状态子宫内膜细胞的黏附率及表达情况。
结果:Western blot、RT-PCR实验显示RL95-2细胞中FUT4的表达明显高于HEC-1A细胞;细胞黏附实验表明胚胎细胞(JAR细胞)与RL95-2细胞的黏附率高于与HEC-1A细胞的黏附率;通过将FUT4干扰质粒转染至RL95-2细胞,FUT4的表达下降,与JAR细胞的黏附率下降;FUT4过表达质粒转染至HEC-1A细胞,FUT4的表达升高,与JAR细胞的黏附率升高:经LeY抗体封闭后,JAR细胞与RL95-2细胞和HEC-1A细胞的黏附率均显著下降。
结论:LeY寡糖抗原,FUT4在不同接受态的子宫内膜细胞中表达不同,在胚胎着床过程中起重要作用,说明FUT4和LeY寡糖抗原的表达与子宫内膜的接受性相关。对LeY寡糖抗原和FUT4在胚胎着床过程作用的研究,有助于更好的了解寡糖在生殖过程中的作用,并将为运用糖生物学手段对胚胎着床过程进行干预提供新的思路和手段。