日本乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)的NS1蛋白是其重要的非结构蛋白,在病毒的增殖、复制、装配、免疫逃避等方面发挥重要作用。前期研究发现宿主蛋白DAZAP2是NS1蛋白的互作蛋白之一,本研究旨在探究宿主蛋白DAZAP2对乙脑病毒的增殖复制是否有影响,进一步揭示宿主蛋白DAZAP2在乙脑病毒增殖与复制中发挥的作用。首先,构建DAZAP2基因的靶向干扰质粒和DAZAP2基因敲除细胞系及检测用标准曲线。研究中成功构建针对DAZAP2基因的靶向干扰质粒,最高干扰效率达53.7%;运用CRISPR/Cas9技术成功构建DAZAP2基因敲除细胞系;成功构建了用于检测干扰质粒转染水平、DAZAP2基因表达情况、评价JEV mRNA水平的NS1基因、E基因及细胞内参β-actin的荧光定量标准曲线,R~2均大于0.99;其次,对DAZAP2蛋白的表达抑制干扰发现其正向调节了JEV的mRNA和子代病毒粒子水平。干扰293细胞上宿主蛋白DAZAP2的表达后,相对荧光定量和WB检测显示JEV增殖复制无明显变化,推断可能由于shRNA的靶向位点的沉默效率不够;在DAZAP2基因敲除细胞系上,接种JEV,运用相对荧光定量、WB及蚀斑分析,发现JEV mRNA水平较对照组提高约1.6倍,子代病毒滴度为6.35 pfu/ml,为对照组的1.27倍,但在该细胞系上转染乙脑病毒复制子,运用相对荧光定量和WB检测,未见明显变化。最后,DAZAP2蛋白过表达发现其影响了JEV mRNA水平。通过相对荧光定量和WB分析,证实过表达宿主蛋白DAZAP2后,感染JEV,其JEV mRNA相较对照组提升约3倍,mRNA水平显著提高。综上结果证实了293细胞的蛋白DAZAP2是一种对JEV的增殖与复制有影响的重要宿主蛋白。