【摘 要】
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目的: RNA干扰(RNA interference,RNAi)是新近发展起来的一种封闭基因表达的有效方法,是在mRNA水平上由内源性或外源性双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的高度特异的基
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目的: RNA干扰(RNA interference,RNAi)是新近发展起来的一种封闭基因表达的有效方法,是在mRNA水平上由内源性或外源性双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的高度特异的基因沉默机制。RNAi的基本原理是将与目的基因同源的含21~23个核苷酸的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染至靶细胞,与细胞内的一系列特异性蛋白形成RNA诱导沉默复合体(RNA induced silencing complex,RISC),RISC以siRNA为模板特异地识别其同源性靶mRNA分子并对其进行递进式剪切,形成强有效的瀑布效应,诱导序列特异性的mRNA降解,从而导致该基因表达下降。RNAi技术目前已广泛应用于基因治疗的研究。由于siRNA的高稳定性及高效特异的沉默诱导效应,siRNA对其靶基因所编码的蛋白表达的抑制效应优于传统的反义核酸技术。因此将siRNA应用于白血病的研究可能为白血病的治疗另辟蹊径。 原癌基因c-myc是myc家族的重要成员,其产物属核蛋白类的磷酸化蛋白质,在正常的细胞增殖、分化及凋亡过程中起重要作用。c-myc原癌基因在多种人类肿瘤细胞中均有扩增和高表达,在HL-60细胞株和白血病病人细胞中同样存在高表达现象。研究表明:用反义寡核苷酸技术和RNAi技术均可封闭c-myc癌基因的异常表达,并能抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。本试验选择高表达c-myc的HL-60细胞作为研究对象,合成靶向c-myc mRNA的siRNA,并将其导入HL-60细胞,观察其对HL-50细胞生长的抑制和c-Myc蛋白表达的影响,进一步通过DNA电泳及流式细胞术,研究该siRNA对HL-50细胞凋亡的影响,为c-myc siRNA作为基因药物治疗白血病提供理论依据。 方法:
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