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本文主要从以下几部分展开：
第一章全套抗体重链、轻链的克隆
目的：
从消化道肿瘤患者外周血中分离淋巴细胞，克隆人全套抗体重链、轻链基因，并重组连接成抗体库构建所需要的VH-linker-VL单链抗体基因。
方法：
在2006年10月1日至12月30日的住院病人中收集外周血：正常(2人×5ml/人)，胃癌(3人×5ml/人)，新生儿(2人×2ml/人)，结直肠癌(3人×5ml/人)，胰腺癌(1人×5ml/人)。密度梯度分离人外周血淋巴细胞， RT-PCR方法扩增全套重链、轻链基因：重叠延伸PCR法构建重组VH-linker-VL单链抗体基因。PCR引物合成时引入Sal I、Not I酶切位点和linker连接片段(Gly4Ser)3。
结果：
RT-PCR克隆得到重链基因产物长度均在400bp左右，κ轻链基因产物长度均在400bp左右，λ轻链基因产物长度均在400bp左右。重叠延伸PCR构建得到VH-linker-VL(κ/λ)单链抗体基因，产物片段约800bp大小。
结论：
本部分实验成功构建了VH-linker-VL(κ/λ)单链抗体基因，为单链抗体库的成功构建提供基础。
第二章T7Select单链抗体库的构建
目的：构建F7Select单链抗体库，并测定抗体库的容量。
方法：
分别对单链抗体基因和T71-2b噬菌体载体DNA进行双酶切，然后用T4连接酶把单链抗体基因克隆进T7载体DNA，然后进行噬菌体体外包装，构建初级抗体库。系列倍比稀释后铺板，测定抗体库库容。初级抗体库经液体扩增后得次级抗体库，再次测定单链抗体库库容。
结果：
初级抗体库库容为1×103，次级抗体库库容为4×109。
结论：
本部分实验成功构建了T7Select单链抗体库，库容高达4×109，为筛选抗CD44v6单链抗体奠定了基础。
第三章抗CD44v6单链抗体的筛选
目的：
筛选融合表达抗CD44v6单链抗体的重组噬菌体，并PCR扩增目的片段，进行进一步分析鉴定。
方法：
FITC免疫荧光标记观察胃癌细胞系SGC7901 CD44v6蛋白表达情况。收集培养SGC7901 细胞，提取膜蛋白;然后从膜蛋白中免疫磁珠亲和纯化得到CD44V6蛋白。以CD44v6蛋白包被ELISA板，固相筛选抗CD44v6单链抗体三轮。PCR扩增第三轮筛选得到的重组噬菌体，测序，并用Ig BLAST (http：//www．ncbi．nlm．nih．gov/igblas/)进行亚组分析。利用Geno3D (http：//geno3d-pbil．ibcp．fr/cgi-bin/geno3d_automat．pl?page=/GENO3D/geno3d_ho me．html)在线工具对单链抗体蛋白质构象进行预测。
结果：
SGC7901高表达CD44v6蛋白。平板试验显示从第一轮筛选到第三轮筛选重组噬菌体表现出明显的富集现象：第一轮筛选噬菌体滴度1.7×108；第二轮1.3×109；第三轮2.3×1010。PCR扩增得到大小约800bp的目的条带。测序结果显示插入片段长度为768bp。Ig Blast序列比对显示单链抗体基因由重链基因IgHV1(分数438比特，E值e-124)和轻链IgLV2(分数400比特，E值e-113)构成。Geno3D以2GKI蛋白构象为模板成功预测了单链抗体的三级结构。
结论：
本部分实验成功筛选到表达抗CD44v6单链抗体重组噬菌体，并克隆出插入片段进行测序分析，不仪验证了单链抗体库的有效性，而且成功筛选到了抗CD44v6单链抗体基因，为后续胃癌治疗性单链抗体的表达奠定了基础。