蒙药山沉香化学成分及超微饮片的系统研究

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目的:以蒙药山沉香为研究对象,对其化学成分及超微饮片进行系统研究,并建立山沉香超微饮片的质量标准规范体系,为深入开发利用山沉香提供科学实验依据。  方法:(1)采用系统溶剂法对山沉香进行提取和萃取,采用多种色谱技术(硅胶柱色谱、薄层层析色谱、高效液相色谱)和光谱学方法(Q-Exactive高分辨质谱、1HNMR、13CNMR)分离鉴定单体化合物;(2)对粉碎时间进行单因素考察,以物料含水量、给料粒度、物料加入量作正交设计,考察超微饮片最佳制备工艺;(3)通过对外观性状、显微形貌分析比较研究,考察其制成超微饮片后的变化;(4)以山沉香中所含的主要活性成分总木脂素为检测指标,以浆状搅拌器法,采用紫外分光光度法对超微饮片与普通粉进行体外溶出实验分析比较,建立溶出动力学模型,并初步探讨其溶出特性;(5)采用HPLC法建立山沉香超微饮片的指纹图谱,并对山沉香超微饮片和普通粉指纹图谱进行比较研究;(6)比较山沉香与沉香超微饮片指纹图谱,对其化学成分进行比较研究,并初步构建沉香高效液相色谱指纹图谱;(7)以显微鉴别法、薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等制订和建立山沉香超微饮片的质量标准规范体系。  结果:(1)从山沉香中分离鉴定了5个化合物,分别为3-羟基-艾莫里烷-3,11-二烯-2,9-二酮、4,4′,9-三羟基-3,3′-二甲氧基-9,9′-环氧木脂素、菲律宾胡椒素VI、落叶松脂素、开环异落叶松树脂酚;(2)正交实验证明,山沉香超微饮片的最佳制备工艺为物料含水量在3.0%-6.0%,给料粒度为80目,物料加入量为600g,粉碎时间为50 min;(3)山沉香体外溶出实验表明:以总木脂素为检测指标,山沉香超微饮片中总木脂素在单位时间内的溶出速率明显高于普通粉(以Td为示:总木脂素累计溶出63.2%时,普通粉需310.7分钟,而超微饮片仅需0.5分钟);总木脂素1小时累计溶出百分率较普通粉提高了约40%;(4)构建了山沉香超微饮片高效液相指纹图谱,并指认了指纹图谱中5个主要特征指纹峰,分别为落叶松脂素、开环异落叶松树脂酚、4,4′,9-三羟基-3,3′-二甲氧基-9,9′-环氧木脂素、3-羟基-艾莫里烷-3,11-二烯-2,9-二酮、菲律宾胡椒素VI,并对10批次山沉香超微饮片和普通粉中10个主要共有峰的单位质量相对峰面积进行t检验,结果P<0.05;(5)在同一色谱条件下,比较山沉香和沉香超微饮片中主要化学成分,结果山沉香和沉香超微饮片指纹图谱化学成分色谱行为相差悬殊,在此基础上,初步构建了沉香超微饮片的HPLC指纹图谱,为沉香超微饮片质量控制提供实验依据。  结论:(1)本实验从山沉香中分离得到5个化合物,其中化合物4,4′,9-三羟基-3,3′-二甲氧基-9,9′-环氧木脂素为首次从该属该种植物中分离得到的化合物,为阐明山沉香止痛、平喘、清热、抗氧化的生物活性提供了实验依据;(2)微粉化技术能明显提高山沉香中总木脂素和主要有效成分的体外溶出度,t检验结果(P<0.05)说明山沉香超微饮片与普通粉的峰面积之间存在显著性差异;(3)同一色谱条件下,山沉香和沉香指纹图谱化学成分色谱行为大不相同,说明山沉香在蒙医临床中代替贵重药材沉香入药的相关物质基础有待进一步研究;(4)山沉香超微饮片质量标准规范体系的建立为山沉香超微饮片的质量控制和规范化生产提供了实验依据。
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