[目的]自异丙酚应用于临床以来,已有大量的与之相关的临床药动学和药效学的文献报道。但到目前为止,涉及到低血容量性休克和超容量血液稀释对异丙酚药动学和药效学影响的报道较为少见,而这些又是临床麻醉中所经常面临的实际问题。因此,对这些课题深入的了解有助于指导临床麻醉的合理用药和减少麻醉药的副反应。本试验以猪为受试对象旨在观察和探讨:1)低血容量性休克的发展历程对血浆异丙酚浓度的影响;2)低血容量性休克的不同阶段对血浆异丙酚浓度的影响;3)失血量与血浆异丙酚浓度的相关性:4)低血容量性休克对肝脏异丙酚摄取和代谢的影响;5)大容量超容量血液稀释对心脏功能的影响;6)大容量超容量血液稀释对血浆异丙酚浓度的影响;7)大容量超容量血液稀释后的血浆增量效应的变化;8)大容量超容量血液稀释对机体氧供耗平衡的影响。 尽管在我国高效液相检测人血浆异丙酚的技术已经成熟,但前期的预试验发现将其应用于检测大动物血浆异丙酚时有明显的局限性。为能顺利的完成本试验的研究,建立起检测猪血浆异丙酚浓度的方法是本课题的关键,因此,需要在借鉴常用的高效液相检测方法的基础上,通过对实验条件的调整使之更适合于检测猪血浆中的异丙酚。另外,创立一种新的异丙酚检测技术—高效毛细管电泳法检测异丙酚的方法,并对该方法进行客观评价。 本研究包括三个部分。第一部分:异丙酚药物浓度检测方法的建立:第二部分:低血容量性休克对血浆异丙酚浓度的影响;第三部分:超容量血液稀释对血浆容量及异丙酚浓度的影响。新扮医科大学临床医学博d匕学位论文 【方法】第一部分:对常用的高效液相检测血浆异丙酚方法的实验条件进行测试和调整,目的在于避免预试验中出现的乳化现象、提取时间过长、绝对提取率低和不稳定以及改变流动相以获得较好的峰形。试验中考察和比较了用乙醚替代其他萃取有机溶剂、三乙胺乙醇替代其他碱性有机溶液和在甲醇一水组成的流动相中加入p一环糊精的结果。另外,还建立了异丙酚毛细管电泳的分离方法及条件,包括运行缓冲液的pH值、运行缓冲液的组分和运行电压等。 第二部分:连续输注异丙酚达到稳定的血药浓度后,每隔30min间断放出10%的预计血容量直至循环衰竭。分别以外周血管阻力和心率表示休克代偿期的指标;平均动脉压低于50mmHg并且不能维持判断为循环衰竭;动脉与肝静脉异丙酚浓度的差值间接反应肝脏对异丙酚的代谢清除能力,同时对低血容量性休克中的动脉异丙酚浓度进行观察。 第三部分:由于新型胶体溶液对凝血机制的干扰越来越轻,这就为临床实施超容量血液稀释中进一步增加胶体液的容量留下了空间。因此在第三部分的研究中应用6%轻乙基淀粉30ml·kg一,(临床常用巧一20 ml·kg一l)输注30min,模拟临床中超容量血液稀释的方法。利用肺动脉导管技术评价心血管功能;观察被稀释后红细胞压积的动态变化,评价超容后的血浆容量变化;以及观察超容后的氧供耗平衡和动脉血浆异丙酚浓度的变化。 【结果】第一部分:确立了以磨香草酚为内标物;乙醚为萃取有机溶剂和在甲醇一水的流动相中加入p一环糊精:选用AgilentZORBAX Extend一C 18色谱柱进行分离;检测波长为273nm,作为高效液相分离异丙酚的基本检测条件。结果血浆异丙酚的最低检测线为0.10 09·ml一‘;绝对提取率超过85%;血浆异丙酚在0.1一4.0 09·ml一’浓度范围内线性关系良好(:=0.9998),回归方程Y二2.68 x 10一3x+5.58xlo一。该方法避免了萃取过程中的乳化现象,大大减少了对异丙酚的提取时间。 通过对异丙酚毛细管电泳分离方法及条件的考察,最终确立了以赓香草酚为内标;检测波长27Onm;电泳条件:石英毛细管柱(75协一2一中文摘要mx37em);运行缓冲液为:300pl乙睛+200协lp一环糊精+500,ISDS+500“l磷酸缓冲液;分离电压为10KV;毛细管柱温为25℃等,作为毛细管电泳的分离方法和条件。结果异丙酚在1一16 09·ml一,浓度范围内线性关系良好(r=0.9991),回归方程Y=5.574X一0.3933;平均加样回收率为101.1%;药物检测限为0.spg·ml一‘:血浆异丙酚检测限为25 09·ml一,。 第二部分:结果表明,放血量小于30%的预计血容量,动脉异丙酚浓度与基础值(l .18士0.2409·ml一,)比较无显著改变。当放血量超过30%的预计血容量和循环衰竭时动脉异丙酚浓度迅速增高;外周血管阻力达到最大值,动脉异丙酚浓度(1,37士0.38 09·ml一‘)比基础值增加117%,心率达到最大值,动脉异丙酚浓度(2.01士o.58pg·ml一l)比基础值增加171%,循环衰竭时动脉异丙酚浓度(2.91士0.46 09·ml一,)是放血前的2.47倍;放血量超过40%的预计血容量以后,动脉异丙酚浓度与放血量呈直线相关(r=0.75),动脉一肝静脉异丙酚浓度差值明显减小,提示肝脏对异丙酚的代谢清除能力开始降低。 第三部分:结果表明,大容量超容量血液稀释后所有受试动物均可耐受,无并发症出现。超容后红细胞压积由基础值28士4%降至16土3%,血浆容量比基础容量增加43%,30min后血浆容量的扩增效应明显减弱降至25%,以后降幅减小;超容后各时点的平均动脉压和心率与基础值比较,无显著变化,超容结束后中心静脉压和肺毛细血管嵌压?