【摘 要】
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目的:广藿香是传统中医防治消化系统疾病的芳香化湿要药,广藿香醇是广藿香的主要活性成分之一。有研究表明广藿香醇对大鼠回肠平滑肌、结肠平滑肌等具有舒张作用,但未见广藿
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目的:广藿香是传统中医防治消化系统疾病的芳香化湿要药,广藿香醇是广藿香的主要活性成分之一。有研究表明广藿香醇对大鼠回肠平滑肌、结肠平滑肌等具有舒张作用,但未见广藿香醇对海绵体平滑肌作用的报道。本课题拟通过体外实验研究广藿香醇对离体大鼠阴茎海绵体平滑肌的舒张作用及其机制,以及在体实验研究广藿香醇对大鼠阴茎勃起功能的影响。方法:1.离体大鼠海绵体平滑肌条用于八腔离体器官灌流槽中进行的张力实验。首先依次累积加入广藿香醇(终浓度为1、10、30、100 μM),观察广霍香醇对离体大鼠海绵体平滑肌的舒张量效曲线。接着,观察预孵育河豚毒素(1μM)和M受体抑制剂阿托品(30 μM)对广藿香醇舒张大鼠海绵体平滑肌作用的影响;观察去除内皮以及预孵育非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME(100μM)、可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ(10 μM)和环氧合酶抑制剂吲哚美辛(10μM)对广藿香醇导致的海绵体平滑肌舒张的影响;观察广霍香醇对KCl预收缩的内皮剥夺的海绵体平滑肌的舒张作用;观察预孵育广藿香醇(100 μM)对累积加入CaCl2至无钙高钾Kreb’s溶液导致海绵体收缩及对在无钙Kreb’s溶液中去氧肾上腺素收缩海绵体平滑肌的影响;观察几种类型的钾离子通道抑制剂四乙胺(TEA,10 μM)、4-氨基吡啶(4-AP,300μM)、格列本脲(10 μM)对广藿香醇舒张去内皮的海绵体舒张作用的影响;观察预孵育广藿香醇(20 μM)对西地那非舒张大鼠海绵体平滑肌作用的影响。2.研究广藿香醇对大阴茎鼠海绵体神经型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA和蛋白表达及对环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的水平的影响。用广藿香醇(20、40、80 μM)灌注离体大鼠阴茎,然后采用ELISA测定阴茎海绵体cAMP和cGMP的水平,RT-qPCR检测阴茎海绵体nNOS和eNOS mRNA表达水平,Western Blot检测阴茎海绵体nNOS和eNOS的表达水平3.24只成年雄性SD大鼠随机分成四组,分别为:对照组、广藿香醇组(海绵体内注射0.1、0.2、0.4 mg/kg广藿香醇)。观察海绵体内注射广藿香醇对大鼠海绵体内压(ICP)的影响。结果:1.广藿香醇对离体大鼠阴茎海绵体平滑肌呈浓度依赖性舒张作用,最大舒张效应为89.12%±4.62%,EC50为20.48 μM;河豚毒素及阿托品对广藿香醇舒张海绵体的作用无明显影响(P＞0.05);去内皮后,广藿香醇的舒张效应显著降低(P＜0.01),但仍残有舒张作用;L-NAME、ODQ显著抑制了广藿香醇舒张大鼠海绵体平滑肌的作用(P＜0.01),而吲哚美辛对广霍香醇的舒张效应无影响(P＞0.05);广藿香醇对KCl预收缩的大鼠海绵体呈剂量依赖性舒张作用。广藿香醇显著抑制累积加入CaCl2至无钙高钾Kreb’s溶液导致的去内皮海绵体的收缩(P＜0.01);在无钙Kreb’s中,预孵育广藿香醇对去氧肾上腺素引起的去内皮海绵体收缩张力无影响((P＞0.05));TEA、4-AP、格列本脲对广藿香醇舒张去内皮的海绵体平滑肌的作用无明显影响(P＞0.05);广藿香醇显著增强西地那非舒张大鼠海绵体平滑肌的作用(P＜0.05)。2.广藿香醇对大鼠阴茎海绵体cAMP水平无明显影响(P＞0.05);广藿香醇显著增加了大鼠阴茎海绵体cGMP水平以及nNOS、eNOS的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05)。3.广藿香醇显著增加了电刺激海绵体神经后海绵体内压的升高。结论:广藿香醇对大鼠阴茎海绵体平滑肌具有舒张作用,其归因于内皮依赖性和非内皮依赖性机制。前者主要与NO-cGMP途径有关,而广藿香醇舒张海绵体平滑肌非内皮依赖性机制可能与拮抗Ca2+内流作用有关。此外,广藿香醇还能增加大鼠海绵体内压。
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