黄芩苷对实验性大鼠牙周炎牙周组织及外周血中BMP-2表达的影响

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目的:牙周病是口腔的常见病与多发病,是造成成年人牙齿脱落的主要原因,同时它还是心血管疾病、糖尿病、新生儿早产等疾病的高危因素。牙周病是侵犯牙周组织的慢性进行性炎症,是一种由细菌感染而引起的破坏性疾病,细菌、菌斑以及其代谢产物是其主要的致病因素。牙周病的主要特征为牙龈炎症、牙周附着丧失、牙周袋形成、牙槽骨吸收、牙齿松动甚至脱落等。因此,牙周病治疗的关键是消除牙龈炎症,促进已破坏和吸收的牙槽骨再生,恢复牙齿及牙周组织的正常功能。目前,牙周病的治疗方法有很多,临床上主要以牙周基础治疗为主,同时配合全身或者局部使用抗生素。这种方法虽取得了一定的成效,却未达到理想效果,并且长期全身应用抗生素可能会造成菌群失调、产生耐药性等不良后果。因此,寻求一种既有抗菌、消炎作用,又能促进牙周组织再生的药物是众多学者研究的方向。中药因对人体刺激小、毒副作用小、成本低等特点得到了人们的关注,国内外学者在中药应用于牙周病治疗方面进行了大量的研究,发现了黄芩苷对牙周致病菌有明显的的抑制作用,并且可以促进成骨细胞、牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)、牙周膜细胞(Periodontal ligament cells,PDLCs)等促进牙周组织再生的细胞生长。骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)是目前研究认为与牙周组织再生密切相关的一种因子,本实验通过探讨黄芩苷对实验性牙周炎大鼠牙周组织及外周血中BMP-2表达的影响,进一步研究黄芩苷在牙周炎牙周组织再生中的作用以及对牙周炎的治疗机制。方法:取46只SD雄性大鼠,随机取8只为空白对照组,脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)局部滴注法建立大鼠牙周炎模型,模型成立后,随机分为4组,牙周炎模型组、阳性对照组、黄芩苷低浓度组、黄芩苷高浓度组。治疗一个月后,分别颈总动脉取各大鼠外周血,然后处死各大鼠,分别取其实验牙区骨段并制作牙体牙周组织联合切片后,常规HE染色观察各组大鼠牙周组织形态学改变,免疫组化法检测大鼠牙周组织中BMP-2的表达,酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠血清中BMP-2、骨碱性磷酸酶(Bone alkaline phosphatase,BALP)的表达情况。取实验部位牙龈组织提取组织蛋白,运用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)的方法检测BMP-2的表达。结果:⑴临床表现和病理结果显示,与空白对照组相比,牙周炎模型组大鼠出现明显的牙周组织炎症症状,牙周支持组织破坏严重,用药干预后,治疗组大鼠牙周组织炎症明显减轻,牙周组织成纤维细胞、成骨细胞生长活跃,破骨细胞及骨陷窝减少,修复再生作用明显。⑵免疫组化结果显示,各组大鼠牙周组织均出现BMP-2阳性表达,黄芩苷高浓度组与阳性对照组阳性染色最明显,二者与对照组和模型组相比存在明显差异,差异均有统计学意义(P<0.05);黄芩苷低浓度组与模型组相比,阳性染色结果无统计学意义(P>0.05);但其与空白对照组相比差异明显,有统计学意义(P<0.05)⑶Western blot结果显示,黄芩苷高浓度组大鼠牙龈组织中BMP-2含量明显高于模型组(P<0.05),但与空白对照组之间差异没有统计学意义(P>0.05);模型组、辛伐他汀组和黄芩苷低浓度组大鼠牙龈组织中BMP-2表达量略低于空白对照组,但它们四者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。⑷酶联免疫吸附法(ELISA)结果显示,与空白对照组比较,模型组大鼠血清BMP-2、BALP含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,辛伐他汀明显增高血清中BMP-2的含量,但对BALP的含量的影响与模型组比较没有显著性差异(P>0.05);黄芩苷低、高浓度组均可明显升高血清中BMP-2、BALP含量,但黄芩苷低浓度组与模型组比较没有显著差异(P>0.05)。结论:(1)通过龈沟底部滴注内毒素脂多糖的方法成功建立实验性大鼠牙周炎模型(2)黄芩苷能够增加实验性大鼠牙周炎牙周组织中BMP-2的表达量,有利于牙周组织的修复再生。(3)黄芩苷能够提高实验性大鼠牙周炎外周血中BMP-2、BALP的含量,具有促进牙周组织修复再生的作用。
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