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磁性高分子微球是一种新型功能性高分子材料,它兼具高分子的众多特性和磁性物质的磁响应性。因此作为酶、细胞、药物等的载体被广泛地应用到了生物工程、细胞学和生物医学等领域。本文选用壳聚糖和磁性纳米粒子结合制备磁性壳聚糖微球,并对其进行接枝改性,以改性磁性壳聚糖微球作为固定化乳糖酶的载体材料。固定化的乳糖酶可以重复回收使用,既节约酶的消耗量,又为自动化生产管理提供了便利的条件。主要研究内容和结论如下:(1)采用化学共沉淀法制备磁流体,优化其制备条件。结果表明,当Fe2+/Fe3+物质的量之比为1/2,反应温度为60℃,熟化温度为85℃,最终pH值≥11,反应时间为1.5 h的条件下,所得磁流体粒径分布均一,有较强的磁性。利用XRD,TEM,VSM及纳米粒度分析仪对样品进行表征,结果表明所得磁流体为Fe304,平均粒径为20nm左右。25℃外加磁场为饱和磁化强度为67.3emu/g,具有超顺磁性特征。(2)采用反相悬浮聚合法,以HEMA与GMA为单体,过硫酸铵为引发剂制备改性磁性壳聚糖微球,研究其制备机理与工艺条件,制备符合高性能载体条件的磁性聚合物微球。研究结果表明,当水油比为0.25,加入6mLSpan-80,壳聚糖浓度为2%(w/v),壳聚糖与四氧化三铁质量比为3:1,单体烯键与壳聚糖单元比值为1:1时,所得磁性壳聚糖微球具有较高的磁响应性,理想的表观性状与性能。使用FT-IR, SEM,光学显微镜,TEM,激光粒径衍射仪,VSM和TGA对所得产物进行表征,结果表明:改性磁性壳聚糖微球呈现为规则的球形,球体表面是致密的接枝改性壳聚糖层,壳聚糖表层成功接枝聚合上HEMA与GMA单体的聚合分子链,有环氧基团的存在,球体中间包裹磁流体,表现为明显的核壳结构。平均粒径为10.67μm,且粒径分布处于较窄的范围内,饱和磁强度为7.0033 emu/g,磁滞曲线显示为无矫顽力,具有超顺磁性。TGA结果显示改性磁性壳聚糖微球中的磁流体约为30.75%。(3)以改性磁性壳聚糖微球为载体,对乳糖酶进行固定化,研究其最优固定化乳糖酶条件。研究结果表明,载体在0.25mol/L、pH7.0磷酸缓冲液中充分溶胀后,按2.0U/mg载体的添加量加入乳糖酶,4℃吸附3h,再添加0.1%戊二醛交联4h。最终所得的固定化乳糖酶活为685U/g载体,酶活回收率为48.18%。固定化后的乳糖酶的pH,热稳定性都较游离酶有明显提高。固定化酶Km为49.36.固定化酶连续操作10次后,固定化酶活仍保持在70%以上,具有良好的操作稳定性。