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大豆皂甙广泛存在于豆科植物中,大豆是皂甙的主要膳食来源。对于大豆皂甙的结构与分类以及生物活性研究已有不少文献报道,有关大豆皂甙降血脂、抗癌、调节免疫、抗氧化、抗诱变和抑制HIV病毒等方面的研究工作更是成为学术界研究的热点。但是关于大豆皂甙抗肿瘤、降血脂的作用机制研究却鲜见报道。本文以天门大豆为原料,利用HPLC-ESI/MS2对分离纯化得到的大豆皂甙进行结构鉴定,并采用生物学前沿技术激光扫描共聚焦显微镜、流式细胞仪、RT-PCR等对大豆皂甙的生物活性,包括抗氧化、体内外抗肿瘤、降血脂的功能作用与机制进行了系统的探索。主要研究结果如下: 1 大豆皂甙的分离纯化与结构鉴定 脱脂大豆粉用80%乙醇溶液按1∶27(W/V)的料液比在60℃下浸提5h,连续提取三次后达到最佳效果,大豆皂甙的提取率为2.58%。大豆皂甙醇提液经浓缩、正丁醇萃取、乙酸乙酯沉淀和大孔树脂D101A柱层析等方法纯化得到了SS-Ⅰ、SS-Ⅱ和SS-Ⅲ三个组分,得率分别为0.107%、0.093%和0.047%。采用HPLC-ESI/MS2联用技术对这三个组分进行系统分析与鉴定,发现SS-Ⅲ中含有Ba、Bb、Bc、Bb’和Be五种皂甙,SS-Ⅱ中除了含有SS-Ⅲ中五种皂甙外还含有A2,与SS-Ⅲ比较,SS-Ⅰ中还富含A1、A4和A2三种皂甙。 2 大豆皂甙体外抗脂质过氧化研究 大豆皂甙在体外具有很强的抗脂质过氧化活性。在大鼠肝匀浆和肝线粒体中加入不同浓度的SS-Ⅰ和SS-Ⅱ,分别研究了它们对大鼠肝组织自发性、H2O2-Fe2+诱导肝组织损伤和肝线粒体生成MDA的影响。结果表明SS-Ⅰ和SS-Ⅱ均能抑制大鼠肝组织和肝线粒体脂质过氧化物的生成,对H2O2-Fe2+诱导的肝组织过氧化损伤具有保护功效。在同样的浓度范围内,SS-Ⅰ抑制脂质过氧化作用的能力强于SS-Ⅱ,这可能与其组成及分子结构有关。 3 大豆皂甙对人宫颈癌Hela细胞凋亡的研究 首次提出大豆皂甙诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡是其抗肿瘤活性的主要机制,细胞周期改变、线粒体跨膜电位下降、细胞胞浆内Ca2+浓度升高以及NO含量增加可能是细胞凋亡的作用机理之一。MTT实验发现100-400mg/L的SS-Ⅱ对Hela细胞的生长有显著的抑制作用,且具有时间-效应和剂量-效应关系,并且对小鼠成纤维细胞L929生长的影响较小。采用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜和激光扫描共