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目的:探讨mi R-137调节靶基因SPHK2对胶质瘤细胞增殖的影响。方法:1.用锁核酸探针原位杂交技术(ISH)检测WHO II-IV级共60例胶质瘤组织和10例非肿瘤对照脑组织中mi R-137的表达水平;采用免疫组织化学方法(IHC)检测上述组织标本中SPHK2、Ki-67的表达水平;分析SPHK2、mi R-137与Ki-67表达水平之间的关系;分析SPHK2、mi R-137与Ki-67表达水平与肿瘤级别的关系,明确其在胶质瘤辅助病理诊断中的意义。2.采用Western blot检测和比较种常见胶质母细胞瘤(GBM)细胞系及人星形胶质细胞系(HA)SPHK2的表达水平;用免疫荧光技术检测U87和U251细胞中SPHK2的定位情况及表达水平。3.利用生物信息学软件预测mi R-137的靶基因并通过荧光素酶实验验证预测结果。利用mi R-137mimics转染GBM细胞系,观察mi R-137对SPHK2m RNA和蛋白含量的影响,以证实上述mi RNA对靶基因表达的调节作用和机制。4.采用克隆形成实验以及Ed U细胞增殖实验等方法检测mi R-137 mimics转染对GBM细胞增殖的影响;通过SPHK2真核表达质粒转染观察补充外源性SPHK2能否逆转mi R-137对GBM细胞增殖的影响,探索该mi RNA抑制胶质瘤细胞增殖的分子通路。结果:1.ISH显示,与非肿瘤对照脑组织相比,胶质瘤中mi R-137阳性标记指数(LI%)均明显降低;IHC显示,与非肿瘤对照脑组织相比,胶质瘤中SPHK2、Ki-67阳性标记指数(LI%)均明显升高,仅Ki-67随肿瘤级别的升高而升高,而其余指标在各级别胶质瘤间无明差异;相关分析显示,mi R-137 LI%与Ki-67 LI%呈显著性负相关,而SPHK2 LI%与Ki-67 LI%呈正相关;ROC曲线分析显示,mi R-137、SPHK2均可作为胶质瘤辅助诊断的诊断标记物,其中mi R-137对高低级别胶质瘤的诊断也有一定的意义。2.九种GBM细胞系中仅A172和U118两个细胞系SPHK2的表达略低于HA细胞,其余胶质瘤细胞系中SPHK2表达水平均显著高于HA中SPHK2的表达。免疫荧光结果也显示,SPHK2在U87和U251细胞系中高表达,且主要定位于细胞核。3.生物信息学分析及荧光素酶实验均证实在胶质瘤细胞中,SPHK2基因是mi R-137的靶基因,q RT-PCR及Western blot检测结果显示mi R-137mimics转染可降低GBM细胞系SPHK2蛋白的水平,而SPHK2 m RNA水平并没有变化,证实mi R-137可通过抑制SPHK2翻译过程在转录后抑制靶基因编码蛋白的表达。4.平板克隆实验及Ed U实验检测结果显示mi R-137可明显抑制GBM细胞增殖,且上述效应可被补充外源性SPHK2部分逆转。结论:1.人胶质瘤组织的肿瘤细胞中普遍有mi R-137表达的异常减少和SPHK2表达的异常增加;mi R-137、SPHK2的表达水平均与胶质瘤密切相关,可作为辅助胶质瘤诊断重要参考指标,且上述各指标间存在相关性。2.在胶质瘤细胞中,mi R-137是SPHK2表达的重要负调节因子,mi R-137表达异常减少是胶质瘤细胞中SPHK2异常过表达的重要原因,在胶质瘤增殖和发生发展调控中起到重要作用。